论文部分内容阅读
目的：评价基于补肾透邪法的加味寿胎颗粒的毒性程度；观察加味寿胎颗粒含药血清的体外抗乙型肝炎病毒的效果和作用，为进一步开展临床研究及进行加味寿胎颗粒的抗病毒机制研究，提供理论及实验依据。 方法：以MTT法检测药物在体外对HepG2.2.15细胞的生长抑制作用，采用酶联免疫法（ELISA法）检测HepG2.2.15细胞上清液中HBsAg、HBeAg的滴度。用定量PCR法检测不同处理组HepG2.2.15细胞上清液中HBV DNA含量。 1.制备加味寿胎颗粒，以其不同浓度溶液灌养SD大鼠6天，抽血制备含药血清。 2.培养、传代HepG2.2.15细胞，接种于96孔细胞板，以不同浓度加味寿胎颗粒含药血清及无血清培养基培养9天，以MTT法判断药物细胞毒作用，计算50％毒性浓度及最大无毒浓度。 3.以加味寿胎颗粒含药血清及无血清培养基培养HepG2.2.15细胞，分别于3、6、9天收集细胞上清液，于3、6天换药。以ELLISA法检测HepG2.2.15细胞上清液中HBsAg和HBeAg含量，计算50%药物抑制浓度和治疗指数。 4.用定量PCR法检测不同处理组HepG2.2.15细胞上清液中HBV DNA含量，观察不同浓度不同作用时间加味寿胎颗粒含药血清对于HBV DNA复制的抑制效果。 结果： 1.成功制备加味寿胎颗粒含药血清并以之培养HepG2.2.15细胞，以MTT法操作并算出50%毒性浓度(CD50)=6.79mg/(g·d)，最大无毒浓度(CD0)=1.47mg/(g·d)。 2.以ELLISA法检测HepG2.2.15细胞上清液中HBsAg和HBeAg含量滴度较阴性对照组低有统计学意义P<0.05，计算出50%药物抑制浓度(IC50)，加味寿胎颗粒含药血清培养 HepG2.2.15细胞3天时其 HBsAgIC50=0.575mg/(g·d)；6天IC50=0.436mg/(g·d)；IC50=0.436mg/(g·d)；9天时IC50=0.316mg/(g·d)。其HBeAg3天时IC50=1.374mg/(g·d)；6天时IC50=1.15mg/(g·d)；9天时 IC50=0.729mg/(g·d)。 治疗指数（TI） 含药血清作用于HepG2.2.15细胞第九天时对HBsAg的治疗指数TI=21.49，含药血清作用于HepG2.2.15细胞第九天时对HBeAg的治疗指数TI=9.313以定量PCR法测量细胞上清液中HBVDNA含量。加味寿胎颗粒各组含药血清对HepG2.2.15细胞作用6d时1.45mg/(g?d)浓度组及9d时0.725-1.45mg/(g?d)浓度组后上清液中HBV DNA含量与空白对照组比较，有显著差异(P<0.05或P<0.01)。 以时间线比较1.45mg/(g?d)浓度组抑制率变化，3、6、9天抑制率分别为36.57%、51.61%、66.00%。 结论： 1.加味寿胎颗粒给药浓度不大于1.47mg/(g·d)时，含药血清于HepG2.2.15是无毒的。 2.加味寿胎颗粒含药血清能有效抑制HBsAg和HBeAg合成。证实加味寿胎颗粒含药血清可以抑制HepG2.2.15细胞合成HBsAg和HBeAg。其作用有量效、时效关系。随着用药时间的延长，加味寿胎颗粒的含药血清对HepG2.2.15细胞合成HBeAg、HBsAg的50%药物抑制浓度降低。 3.证实加味寿胎颗粒含药血清可以抑制HepG2.2.15细胞合成HBV DNA。其作用有量效、时效关系。