溶磷微生物在土壤中磷循环相关的生物学系统中担任着重要的角色,它可以将难溶磷素转化为可溶性磷,提高磷肥利用率,本论文围绕溶磷微生物开展相关工作,取得以下结果: 本实验从北京部分地区采集4种土样分离纯化出30株溶解无机磷的细菌,对分离的细菌和本实验室保藏菌株(22株)进行溶无机磷定性和定量的筛选,对其中编号为C-2、C-12、C-15、CW-1的4株细菌利用Biolog微生物自动鉴定系统进行鉴定,结果表明C-2为石竹伯克霍尔德氏菌(Burkolderia caryophylli),C-12为阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae),C-15为铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginsoa),而CW-1未能鉴定到种。对其中的C-12进行相关的生理生化实验,测定其16S rDNA序列并分析,结果也表明该菌株在分类上归属阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)。 选取C-12菌株利用Tn5转座子进行三亲本杂交,构建了约20,000个接合子的突变文库,并进行了相关的筛选工作,经过多种方法没有筛选到溶无机磷的突变菌株,推测控制细菌溶无机磷的性状因素较多,需要新的方法挑选该类表型的突变。根据已发表的溶无机磷的基因pqqE的保守序列设计简并引物,扩增出该基因的核心片段582bp,经分析与其他细菌中的该基因核苷酸的最高同源性85%,将该片段标记后经Southern bloting验证pqqE基因在该菌基因组中存在且为单拷贝。