目的：肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae, S. pn）是一种常见的定植于人类上呼吸道黏膜表面的革兰阳性菌，能引起肺炎、脑膜炎、败血症、中耳炎等一系列疾病。在全球范围内，特别是亚非发展中国家，肺炎链球菌感染是现阶段引起儿童死亡的主要原因之一。肺炎链球菌疫苗是当前十分急需的疫苗，但目前使用较广的肺炎链球菌疫苗都有其明显的局限性，主要体现在生产成本高、血清型转换和所覆盖的血清型与发展中国家的感染高发血清型契合度不高等方面。我们在前期实验中得到了一株无荚膜的2型肺炎链球菌突变株SPY1。该菌高度减毒，经鼻高剂量(5×108CFU/只)感染幼鼠不会导致其死亡。我们尝试将其作为减毒活疫苗免疫小鼠，实验结果提示其对成年鼠有良好的保护作用，但对幼鼠的保护作用有限。使用佐剂是提高疫苗保护效果的有效手段。Compound48/80（C48/80）是N-甲基-对甲氧基苯乙胺和甲醛缩合产生的聚合物,能够促进肥大细胞脱颗粒，是常用的肥大细胞活化剂。一系列研究提示C48/80在炭疽和流感疫苗的成年鼠模型中体现了良好的佐剂性。因此，本研究旨在评估以C48/80为佐剂的减毒活疫苗候选株SPY1在幼鼠模型中的保护效果并探究其保护机制，进而为针对幼年个体的肺炎疫苗研发提供理论和实践基础。方法：用SPY1、SPY1+C48/80、SPY1+CT、SPY1+Pam2CSK4经鼻自C57/BL6幼鼠2周龄起开始免疫，以C48/80、CT、Pam2CSK4作为佐剂对照，PBS作为阴性对照。末次免疫后1周，酶联免疫吸附法（ELISA）测定抗原特异性IgG和分泌性IgA（SIgA）及细胞因子水平，用以评价免疫对体液免疫和细胞免疫的刺激作用。末次免疫后2周，采用19F型肺炎链球菌经小鼠鼻腔攻毒，于攻毒第3天取小鼠鼻腔灌洗液，计数细菌载量；以2型肺炎链球菌D39经小鼠鼻腔攻毒，监测小鼠生存率；从免疫后小鼠的抗肺炎链球菌鼻腔定植能力和抗致死性肺炎链球菌感染能力两个方面评估免疫接种的保护效果。在明确保护效果的基础上，利用缺陷鼠建立定植模型，初步探讨B细胞及细胞因子（IL-4、IL-17A）在抗定植免疫过程中的作用。此外，通过生存率实验评价幼鼠对SPY1的耐受性；从体重变化、超敏反应、肺组织病理学改变三个方面，评价C48/80的安全性。结果：经典黏膜佐剂CT、Pam2CSK4和C48/80与SPY1联用时均能有效促进IgG反应，但末次免疫后三个月，只有CT和C48/80与疫苗的联用组中的IgG滴度能够维持。佐剂和SPY1疫苗联用的3个实验组的IgG1、IgG2a、IgG2b均显著高于仅用SPY1免疫的实验组。然而除SPY1+CT组的唾液IgA显著高于SPY1组外，其他各免疫组的唾液IgA水平与SPY1组相比均无统计学差异；所有含SPY1的免疫组的鼻腔灌洗液中IgA水平均不高，且两两之间无统计学差异。CT和C48/80均能刺激起Th1/Th2/Th17三型免疫反应，而Pam2CSK4无法刺激Th2型因子IL-4的分泌。此外，特别值得重视的是，C48/80在实验中展现了CT和Pam2CSK4所不具备的抗肺炎球菌定植的能力。我们发现仅经SPY1免疫的小鼠对抗肺炎球菌定植依赖B细胞和IL-17A，而C48/80可通过增强B细胞反应和Th17型免疫反应进一步加强这种定植清除作用。在安全评估实验中，我们发现幼鼠经C48/80连续滴鼻后，体重增长未受影响、血清IgE未见上升、肺组织未见显著损伤；经CT连续滴鼻对照组中的幼鼠普遍出现体重增长迟滞、血清IgE显著上升及肺组织病变。结论：我们的发现说明在利用SPY1作为疫苗的幼鼠模型中，C48/80作为佐剂，在刺激体液免疫和细胞免疫的能力方面与CT相当，优于Pam2CSK4。C48/80和CT均具有促进免疫记忆的能力,但C48/80与CT和Pam2CSK4相比具有抗肺炎链球菌定植的特殊能力。SPY1及C48/80对在抗定植的过程中，均依赖B细胞和IL-17A。在抗致死性2型肺炎链球菌感染的能力方面，C48/80甚至优于CT。在与CT佐剂的对比中，C48/80展现了其在安全性方面的优势，这为C48/80应用于人体提供了可能性。