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达氟沙星（Danofloxacin,DAN）,作为第三代氟喹诺酮类药物,具有广谱抗菌活性。DAN可以通过抑制革兰氏阳性菌中的DNA回旋酶和革兰氏阴性菌中的拓扑异构酶IV阻断细菌进行DNA复制,从而杀灭细菌,因此DAN在畜牧、家禽以及水产品养殖业中被广泛使用。然而,人体摄入过量的DAN会出现过敏、头痛、腹泻和肝损伤等症状。DAN的滥用还会导致细菌耐药性,严重威胁人类健康。因此,美国、欧盟以及中国在动物源性食品中均制定了严格的DAN限量要求。酪胺信号放大技术（Tyramine signal amplification,TSA）是一种基于酶介导的信号放大技术,其原理是:辣根过氧化物酶（Horseradish peroxidase,HRP）催化H2O2生成的羟基自由基（Hydroxyl radical,·OH）可以将酪胺（Tyramine,TYR）转化为自由基中间体,该自由基中间体能相互结合或与周围的蛋白残基（包括色氨酸、组氨酸和酪氨酸残基）结合,将TYR与荧光素等信号物质偶联,触发苯酚聚合反应后可引起信号放大。本研究将TYR偶联在金纳米粒子（Gold nanoparticles,Au NPs）表面形成TYR-Au NPs,以HRP催化诱导TYR-Au NPs聚集引起的信号变化作为信号输出,从而实现DAN的高灵敏可视化检测。本研究基于TSA建立了一种免疫层析方法（Lateral flow immunoassay,LFIA）用于DAN的检测。通过抗原抗体特异性反应,HRP标记的Ig G（HRP-Ig G）经免疫层析固定在检测（Test,T）线或质控（Control,C）线上。HRP催化H2O2产生的·OH可以将TYR与HRP表面的酪氨酸残基均转化为活性中间体,从而诱发TYR与HRP共价结合,进而引发TYR-Au NPs在T线或C线上聚集。当待检样本中存在DAN时,会抑制或完全阻断T线上HRP的结合,进而实现DAN的灵敏检测。对关键实验参数进行了优化,最佳T线全抗原（DAN-BSA）浓度、抗DAN单克隆抗体（Monoclonal antibody,m Ab）用量、HRP-Ig G体积、TYR-Au NPs体积和H2O2浓度分别为1 mg/m L、40 ng、3μL、40μL和0.1 M。通过绘制反应动力学曲线,确定Au NPs聚集显色的最佳时间为23 min。在最优条件下,TYR-Au NPs LFIA检测DAN的标准曲线为y=0.43 lg x+0.66（R~2=0.995）,定量检测限为0.032 ng/m L,线性范围为0.25-5 ng/m L,裸眼定性检测限为2.5 ng/m L。与传统Au NPs-LFIA相比,本研究建立的TYR-Au NPs LFIA的定量检测灵敏度提高了7倍,定性检测灵敏度提高了3倍。加标回收实验表明,TYR-Au NPs LFIA在鸡肉加标样品中的回收率为86.04%-105.14%,变异系数（Coefficient of variation,CV）为1.71%-2.05%;在猪肉加标样品中的回收率为92.41%-110.19%,CV为4.42%-6.37%。本研究基于TSA建立了一种表面等离子体共振酶联免疫吸附法（Surface plasmon resonance enzyme linked immunosorbent assay,p ELISA）用于DAN的检测。HRP催化H2O2生成的·OH可以诱导TYR相互交联,使得TYR-Au NPs聚集,Au NPs溶液由红色变为蓝色。碱性磷酸酶催化抗坏血酸2-磷酸盐产生的抗坏血酸还原·OH,使得TYR无法相互交联,从而阻断TYR-Au NPs聚集,Au NPs溶液可维持原本的红色。当待检样本中存在DAN时,Au NPs溶液颜色由红色变为蓝色。对关键实验参数进行了优化,最佳m Ab、抗坏血酸2-磷酸盐和H2O2的浓度分别为0.2μg/m L、1.0μg/m L和0.5 mmol/L。在最优条件下,本方法检测DAN的裸眼检测限为0.4 ng/m L,相较于传统ELISA提高了24倍。对加标鸡肉和猪肉样品进行检测,结果显示本方法准确度和稳定性较高。综上所述,本研究基于TSA分别建立了LFIA和p ELISA,实现了对DAN的高灵敏定性定量检测,为食品危害物的快速检测提供了新思路。