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研究目的：子宫颈癌是女性第三大常见恶性肿瘤,持续性感染高危型人乳头瘤病毒(HPV)是引起子宫颈癌的主要因素。其中HPV16与子宫颈癌的关系最为密切,因此开发检测HPV16的诊断技术,对于防治子宫颈癌具有重要意义。本论文通过经典的单克隆抗体制备方法,筛选抗DNA-RNA杂合体的高特异性单克隆抗体,进一步进行酶标抗体的制备以及特异性HPV16RNA探针的制备,开发了人乳头瘤病毒(HPV)检测试剂盒。研究方法：第一部分：抗DNA-RNA杂合体的高特异性单克隆抗体的制备以及酶标抗体的制备通过经典的单克隆抗体制备方法,筛选抗DNA-RNA杂合体的高特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株；杂交瘤细胞经无血清培养分泌抗体,用Protein G秦和层析柱分离纯化抗体。用抗DNA-RNA杂合体的鼠源单克隆抗体和辣根过氧化物酶进行偶联。第二部分：特异性HPV16RNA探针制备以HPV16DNA作为模板,转录特异性的HPV16RNA探针。第三部分：人乳头瘤病毒(HPV)核酸检测试剂盒的开发HPV16DNA经变性后与特异性HPV16RNA探针杂交；用双抗夹心实验筛选出检测DNA-RNA杂合体的最佳包被抗体和酶标抗体组合,完成人乳头瘤病毒(HPV)核酸检测试剂盒的开发。研究结果：1.经过筛选和克隆化,获得了两株单克隆抗体细胞株：3B5和9C6; ProteinG亲和层析柱纯化得到单克隆抗体3B5312μg (1.2μg/μl,260μl);9C6330μg (1.5μg/μl,220μl).酶标抗体3B5-HRP、9C6-HRP经ELISA检测偶联有效。2.以HPV16DNA作为模板,转录特异性的HPV16RNA探针,得到85.5gg(0.9pg/μl,95μgl)。3.通过一系列的条件摸索最终确定用1μg/ml的3B5作为包被抗体,1/400稀释度的9C6-HRP作为酶标抗体,10μg/ml的HPV16RNA探针浓度检测HPV16DNA在1pg/ml-100ng/ml之间存在较好的线性关系,基本已完成人乳头瘤病毒(HPV)核酸检测试剂盒的开发。结论：通过经典的单克隆抗体制备方法,筛选抗DNA-RNA杂合体的高特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株3B5和9C6,并成功的完成了酶标抗体的制备；成功制备了特异性的HPV16RNA探针；通过一系列的条件摸索最终确定用1μg/ml的3B5作为包被抗体,1/400稀释度的9C6-HRP作为酶标抗体,10μg/ml的HPV16RNA探针浓度检测HPV16DNA在1pg/ml-100ng/ml之间存在较好的线性关系,基本已完成人乳头瘤病毒(HPV)核酸检测试剂盒的开发。