目的：包被抗原作为过敏原检测试验中的关键因素,直接影响检测结果的准确性和敏感性。中华对虾(Fenneorpenaeus Chinensis,F)是中国天津地区甲壳类食物引起的过敏反应中常见的物种,因此,本实验以中华对虾为研究对象,分析中华对虾蛋白提取液中与虾过敏患者血清中特异性I西结合的蛋白组分,即中华对虾的主要致敏蛋白。在此基础上,将主要的致敏蛋白进行初步纯化,并通过实验验证提取蛋白作为包被抗原时的检测敏感度。总之,本研究目的是期望通过优化包被抗原,提高患者血清特异性IgE检测结果的敏感性。方法：1.中华对虾蛋白组分及主要过敏原的鉴定：将提取的中华对虾的蛋白溶液通过SDS-PAGE技术进行蛋白组分分析。以虾过敏患者血清中特异性IgE作为“探针”,利用western-blot鉴定中华对虾蛋白中的主要致敏蛋白组分。2.中华对虾主要致敏蛋白组分的初步纯化及鉴定：采用两种方法对目的蛋白进行分离。将分离的中华对虾主要致敏蛋白通过SDS-PAGE实验和免疫印迹抑制实验,分析是否达到了纯化目的,并比较分析两种方法的纯化效果,选取较优的方法纯化大量目的蛋白,进行接下来的实验。3.中华对虾主要致敏组分作为包被抗原在血清特异性IgE检测中的初步应用：利用斑点印迹实验比较两种蛋白分别作为包被抗原时检测同一份患者血清中特异性IgE的结果；并通过间接酶联免疫吸附实验对分离的有效组分的检测敏感性进行评估。结果：1.中华对虾蛋白组分及主要过敏原组分的鉴定：中华对虾蛋白提取液经SDS-PAGE实验结果显示,虾蛋白提取液中至少有15种可辨认的蛋白显色条带,其相对分子量分别是：130、110、90、87、83、72、70、65、50、39、37、34、29、24和19kDa。其中,大于55kDa的蛋白种类较多,但每种蛋白的浓度相对较低；小于55kDa的蛋白种类较少,含量较多,其中以50kDa、39kDa和19kDa三处的条带最为明显,蛋白含量较高。以20例单例虾过敏患者阳性血清和1例阴性对照血清为探针的免疫印迹实验结果显示：分子量为34、55、72、100、130、140、170以及>170kDa处为显色条带多发区,统计分析主要和20例虾过敏患者的血清特异性IgE的虾蛋白溶液的反应条带后发现,大于55kDa的多种蛋白为主要反应蛋白,该处的显色条带较多,且有些条带的颜色较深。2.中华对虾主要致敏蛋白组分的纯化及鉴定：通过葡聚糖凝胶层析法和超滤离心法纯化的虾主要致敏蛋白经SDS-PAGE分析,分子筛层析法收集的peak1-6B蛋白组分主要是55kDa以上的大分子量蛋白组分,有效减少了分离前50、39和19kDa处的蛋白含量；超速离心分离法将19kDa的蛋白去除,但39和50kDa分子量的蛋白残留较多,分离效果不如分子筛凝胶层析法。通过分子筛凝胶层析法大量纯化虾蛋白中的主要过敏原蛋白,将其作为抑制剂进行免疫印迹抑制实验的结果显示,提取的虾主要致敏蛋白可以有效的抑制虾溶液中和过敏患者血清中特异性IgE反应的组分。3.中华对虾主要致敏组分作为包被抗原在特异性IgE检测中的初步应用：通过斑点印迹实验比较两种蛋白溶液作为包被抗原时的反应性。斑点印迹结果经过Image J软件分析得到的灰度值显示：患者血清中特异性IgE含量较低时,提取的虾主要致敏组分作为抗原的检测体系可以提高检测的敏感度。间接ELISA实验结果显示：14例虾过敏患者中,除2例患者的虾蛋白溶液作为检测抗原的OD值高于peak1-6B组分作为检测抗原的OD值外,其余12例患者血清以peakl-6B组分作为包被抗原的OD值均高于虾蛋白溶液组。结论：1.通过SDS-PAGE技术确定了中华对虾中的主要的蛋白组分,电泳结果中清晰可辨的蛋白有15种。2.研究表明本地区虾过敏患者血清特异性IgE能够识别的虾提取蛋白溶液中主要的显色条带集中在大于55kDa分子量范围的多种蛋白处。采用分子筛凝胶层析的分离方法初步获得了具有免疫活性的peak1-6B组分。3.以纯化的peak1-6B组分作为包被抗原,可以在虾过敏患者血清中特异性IgE含量较低时有效的提高检测的敏感度。