鸡新城疫病毒单克隆抗体的制备与鉴定

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本研究利用淋巴细胞杂交瘤技术,经细胞融合、筛选和克隆化,建立了一株能稳定分泌抗新城疫病毒(NDV)的单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞株,并对其分泌的单克隆抗体(McAb)进行了初步鉴定。试验采用鸡胚尿囊腔接种病毒的方法繁殖NDV,差速离心法对NDV进行纯化,用纯化的NDV做为抗原,与弗氏佐剂充分乳化后,免疫Balb/C小鼠。取免疫小鼠的脾细胞与NSO浆细胞瘤细胞,在聚乙二醇(PEG-1500)作用下进行细胞融合,用间接ELISA和血凝抑制试验(HI)进行阳性杂交瘤的筛选,挑选效价高的杂交瘤细胞进行有限稀释法克隆和亚克隆,建立阳性杂交瘤细胞株,最终得到一株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞,命名为4F12。采用体外细胞培养和体内诱生腹水的方法制备了其McAb。对获得的单克隆抗体采用酶联免疫吸附实验(ELISA),血凝抑制实验(HI),Western-blotting方法进行鉴定。杂交瘤细胞培养上清和腹水的ELISA效价分别为1:160和l:3.2×104。获得的单克隆抗体与NDV具有良好的特异性反应,与鸡胚阴性尿囊液、鸡正常组织、鸡IgG、鸡传染性法氏囊病毒、鸡传染性支气管炎病毒、鸡流感病毒均无交叉反应性。HI试验表明制备的单抗没有血凝抑制活性。Western-blotting证明获得的单抗与新城疫病毒蛋白有特异性反应。经连续传代20次,4个月内连续冻存,复苏3次,4F12杂交瘤细胞株仍能稳定分泌抗体。抗鸡NDV单克隆抗体的成功制备为NDV的研究及快速诊断方法的建立奠定了基础。
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