DNA纤维荧光原位杂交技术的建立及其在玉米中的应用

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该文在利用RAPD技术得到了两个玉米B染色体特异序列B1320、B480的基础上,为了确定B1320、B480在B染色体上的精确定位,以随机引物法分别标记的地高辛(羊抗地高辛抗体偶联荧光素FITC)和生物素(链霉抗生物素蛋白偶联Cyanine3)的B1320、B480为探针,进行染色体中期、间期和DNA纤维3种多色(双色)荧光原位杂交分析.结果表明:B1320和B480都定位于玉米 B染色体着丝粒区,两者红色和绿色的荧光信号在中期染色体、间期核上不能分辨,由此可以判断中期两者在基因组物理图上相距1Mb以内,在间期50Kb以内.在DNA纤丝上,两者的信号是呈不连续的长链状,红色和绿色荧光信号间隔排列,部分产生重叠的黄色信号,B1320、B480在DNA纤丝上相互距离<1Kb.同时还将高度重复序列45SrDNA的信号放大到线性DNA分子水平.初步测量了其在玉米基因组中的拷贝数.通过对B1320和B480的FISH分析,丰富了对玉米B染色体着丝粒区域DNA分子组成的了解,为今后灾光原位杂交在玉米基因组中应用做了有益的探索.
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