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分别以凡纳滨对虾的壳膜和内脏为材料,通过匀浆、离心,获NAGase粗酶液。通过对不同生长期凡纳滨对虾NAGase的比较研究,结果显示不同生长期凡纳滨对虾壳膜和内脏NAGase的比活力有不同的变化规律,但最终都升稳在一定值。壳膜和内脏的NAGase最适pH都是5.5,pH稳定范围基本都是5.0-7.0,最适温度分别为30-35℃和37-40℃,温度稳定性均较差。酶动力学研究表明,不同生长期对虾壳膜和内脏NAGase的Km、Vm活化能Ea均存在不同程度的差异;同生长期的壳膜NAGase的Km值均比内脏NAGase的Km值高。
比较健康和患红体病的凡纳滨对虾壳膜与内脏NAGase的活力和性质的差异。结果表明:对虾患红体病前后体内的NAGase活力、基本酶学性质等均存在差异。患病后壳膜NAGase比活力有轻微的上升,而内脏NAGase比活力则发生较大幅度地下降;患病后,壳膜与内脏NAGase的催化反应动力学常数Km和Vm值、活化能均较高,但其最适温度较低,pH稳定性及热稳定性较差。同时,不同生长期、对虾患病前后,壳膜与内脏来源的NAGase对外界各影响因子(Hg2+、Zn2+、Cu2+、Cd2+、Pb2+、Al3+等重金属离子污染物;乙醇、甲醛、苯酚、甲醇、二氧六环、DMF、DMSO等有机污染;脲、NBS、SDS等常用化学修饰剂及变性剂)的敏感性也发生了变化。
研究养殖常用药物对凡纳滨对虾壳膜与内脏NAGase的活力调控。结果表明:次氯酸钠、三氯异氰尿酸对两种来源的酶的抑制为不可逆过程。青霉素钾、链霉素、庆大霉素、卡那霉素等对壳膜与内脏来源的NAGas活力基本上没有影响;盐酸环丙沙星对两种来源的酶有激活作用,而诺氟沙星和磺胺甲噁唑对酶活力则有不同程度的抑制作用。磺胺甲噁唑对壳膜NAGase表现为混合型可逆抑制,对内脏NAGase表现为非竞争性抑制;诺氟沙星对内脏NAGase为混合型可逆抑制。考察几种养殖常用维生素对内脏NAGase活力的影响,其中VB12、烟酸、核黄素等对酶活力基本上没有影响;而VB1、VB6、抗坏血酸等对该酶活力均有不同程度的抑制作用,进一步研究了VB6的抑制作用动力学,其对酶的抑制作用为非竞争性可逆抑制。
对凡纳滨对虾进行养殖试验,研究重金属离子对对虾NAGase活力影响,在不同时间取样并考察Cu2+、Zn2+、Cd2+、pb2+、Hg2+等重金属离子对凡纳滨对虾壳膜及内脏NAGase活力的影响。结果显示5种重金属离子在低浓度下短时间内对凡纳滨对虾壳膜与内脏的NAGase活力没有显著影响,48h后随作用时间的延长,重金属离子使两种来源的NAGase活力均逐渐降低,表现为显著性抑制的剂量效应关系。