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【目的】1-磷酸鞘氨醇(sphingosine-1-phosphate,S1P)作为一种信号鞘磷脂,在血浆中主要与高密度脂蛋白(high-density lipoprotein,HDL)结合,并通过结合其5个膜受体(S1PR1~S1PR5)来介导HDL诸多功能。清道夫受体B类I型(Scavenger receptor class B type I,SR-BI)是HDL的天然高亲和生理性受体,也能结合载脂蛋白A-I(Apolipoprotein A-I,apo A-I)来介导HDL的诸多功能。有研究报道称S1P/S1P1可以通过PI3K-Akt信号通路来介导内皮细胞的迁移,而HDL可以通过SR-BI介导的信号通路来介导许多生物学功能,这其中也涉及PI3K-Akt通路的活化。但有关HDL/SR-BI通过PI3K-Akt信号通路来介导内皮细胞的迁移以及HDL/SR-BI和HDL-S1P/S1P1通过PI3K-Akt信号通路共同调节人脐静脉内皮细胞的迁移未见报道。另外,SR-BI是否可以影响HDL-S1P/S1P1对内皮细胞的迁移的调节需进一步探讨。因此,本论文主要研究HDL/SR-BI和HDL-S1P/S1P1通过PI3K-Akt信号通路共同调节人脐静脉内皮细胞的迁移以及SR-BI影响HDL-S1P/S1P1对内皮细胞的迁移的调节,为全面了解HDL的内皮保护功能提供新的理论基础。【方法】1.转染pc DNA3.1(-)-h SR-B1重组表达质粒48小时或SR-BI抑制剂BLT-1处理后,分别用S1P、HDL和apo A-I处理人脐静脉内皮细胞8h和24h,分别通过细胞划痕实验及Transwell实验检测细胞迁移,同时采用Western Blot检测磷酸化的PI3K和Akt蛋白表达水平。2.S1P1激动剂SEW2871或S1P1抑制剂W146处理后,分别用S1P、HDL和apo A-I处理人脐静脉内皮细胞8h和24h,分别通过细胞划痕实验及Transwell实验检测细胞迁移,同时采用Western Blot检测磷酸化的PI3K和Akt蛋白表达水平。3.PI3K抑制剂LY294002或Akt抑制剂GSK690693处理后,分别用S1P、HDL和apo A-I处理人脐静脉内皮细胞8h和24h,分别通过细胞划痕实验及Transwell实验检测细胞迁移。4.转染pc DNA3.1(-)-h SR-B1重组表达质粒48小时或SR-BI抑制剂BLT-1处理后,用HDL分别处理人脐静脉内皮细胞0h、2h和6h后,通过Western Blot检测S1P1蛋白表达水平。【结果】S1P、HDL和apo A-I都能促进内皮细胞迁移,HDL最明显。在过表达SR-BI后,与对照组中HDL组相比HDL使内皮细胞迁移增加了大约20%,而在抑制SR-BI后HDL使内皮细胞迁移减少了大约25%。在激活S1P1后,与对照组中HDL组相比HDL使内皮细胞迁移增加了大约10%,而在抑制S1P1后HDL使内皮细胞迁移减少了大约10%。S1P、HDL和apo A-I都能增加磷酸化的PI3K和Akt蛋白表达水平,HDL最明显。在过表达SR-BI后HDL使磷酸化的PI3K和Akt蛋白表达水平升高的幅度比在抑制SR-BI后HDL使磷酸化的PI3K和Akt蛋白表达下降幅度大。在激活S1P1后HDL使磷酸化的PI3K和Akt蛋白表达升高水平与在抑制S1P1后HDL使磷酸化的PI3K和Akt蛋白表达减少水平大约一致。抑制PI3K或Akt后,S1P、HDL和apo A-I促进内皮细胞迁移能力消失。HDL能诱导S1P1降解。过表达SR-BI后,HDL导致的S1P1降解减慢。【结论】1.S1P、HDL和HDL中的成分apo A1均可促进人脐静脉内皮细胞的迁移。2.SR-BI可以影响HDL-S1P/S1P1对内皮细胞的迁移的调节。3.apo A1/SR-BI和S1P/S1P1通过PI3K-Akt信号通路共同调节人脐静脉内皮细胞的迁移。