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禽流感和新城疫是世界上两种最重要的禽源的病毒性人兽共患传染病。这两种病毒病对养禽业产生了重大影响。近年来,禽流感和新城疫的不断发生和流行不仅严重影响了人民的消费信心,也导致国际间的禽类产品贸易受阻。而且现在困扰家禽产业最重要的问题是H5、H7、H9亚型流感病毒造成的危害不断增强且直接感染人的数量不断增加。目前常规诊断禽流感和新城疫的技术如鸡胚病毒分离试验、琼脂凝胶扩散(AGP)、血细胞凝集抑制试验(HI)、ELISA方法等在时间和准确性上无法保证,所以一种快速、准确、高效的检测方法应运而生。实时荧光定量RT﹣PCR技术(real-time fluorescent quantitative RT-PCRtechnology)是一种新型的分子核酸检测技术。本试验根据禽流感病毒M基因、HA基因、新城疫病毒M基因的保守序列,分别设计了特异性的引物与探针,建立了一种能灵敏、特异、快速的检测通用型、H5、H7、H9亚型禽流感病毒和新城疫病毒的一步荧光定量RT﹣PCR方法。最终开发出可以在短时间内即可完成对待检样品的检测并能成功判定出禽流感与新城疫病毒的存在的快速诊断试剂盒。随着人民对绿色产品的需求以及各项出口检验检疫标准的增加,该技术将会很快得到推广和应用。在临床实践工作中,如果对所有亚型都分别设计合成特异的引物和探针,逐一测试,不仅浪费人力、物力和财力,而且也是不必要的。所以,先用AIV和NDV的通用型探针、引物验证是否是禽流感病毒和新城疫病毒,如果存在禽流感病毒,可以再用临床常流行的H5、H7、H9亚型流感病毒的探针、引物进行检测,不仅加快了检测速度,也避免了不必要的浪费。通用型荧光RT-PCR同其他亚型荧光RT-PCR一样,在检测禽流感病毒感染尿囊液时,能检测出禽流感病毒的最高稀释度可达10-10。