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目的:通过研究洛伐他汀(Lovastatin)对恶性黑色素瘤(malignant melanoma ,MM)B16细胞株体内、外的作用,观察洛伐他汀联合顺铂(Cisplatin,DDP)对B16细胞株体内、外作用的影响,进一步阐明洛伐他汀作用的可能机制,初步探讨其用于恶性黑色素瘤治疗及化学预防的可行性。方法:1体外实验:以不同浓度的洛伐他汀(Lov)作用于培养的B16细胞,用四甲基偶氮唑蓝(tetrzolium-based colorimetric assay,MTT)比色试验检测细胞的增殖活性,并观察细胞的形态学变化。采用MTT比色法检测洛伐他汀联合对B16细胞株的增殖抑制作用,采用金氏公式[1]分析相互作用指数(Iteraction Index),评价联合后的作用,如q>0.85表示相加作用,q<0.85为拮抗作用。2体内实验:建立B16细胞C57小鼠皮下移植瘤模型,随机分为5组:空白对照组(8只):给予等渗盐水灌胃1次/日;Lov1组(12只):给予Lov 4mg/(kg﹒d)灌胃;Lov2组(12只):给予Lov 16mg/(kg﹒d)灌胃;顺铂组(12只):给予顺铂10mg/kg(d14、21)腹腔注射;联合组(12只):给予Lov 16mg/(kg﹒d)+顺铂10 mg/kg(d14、21);成瘤后测量各小鼠肿瘤的最长径和最短径,隔日一次,计算肿瘤体积。采用免疫组化法测定Survivin、Fas、VEGF表达水平。结果:1体外实验: MTT比色法显示洛伐他汀(0.5、1、2、4、8、16、32μmol/L)对B16细胞增殖具有抑制作用。不同浓度洛伐他汀处理细胞24-72h后,与对照组相比,各处理组OD值均有不同程度下降,差异具有显著性(P<0.05)。且随洛伐他汀处理浓度的增大、作用时间的延长,OD值逐渐下降,即洛伐他汀对B16细胞的增殖抑制作用呈明显的时间-剂量依赖效应。MTT比色法分析洛伐他汀联合顺铂对B16细胞的增殖抑制作用,结果显示:2、4、8、16μmol/L的洛伐他汀可加强顺铂对B16细胞的增殖抑制作用。且随洛伐他汀浓度的增大,其对顺铂的协同作用增强。光镜下观察细胞形态结果显示:未经药物作用的细胞呈梭形,形态饱满,而用药组细胞皱缩,破裂,呈不规则形,有的细胞两端出现细长的伪足,脱落细胞增多,明显抑制了B16细胞的生长,细胞出现明显的形态学改变。金氏公式分析相互作用指数显示,不同浓度顺铂联合2、4、8、16μmol/L的洛伐他汀的q值均大于0.85。2体内试验:C57小鼠接种B16细胞后3-5天,多数小鼠可以触及到瘤体,种瘤后第21天测得各处理组小鼠肿瘤体积明显小于空白组,差异具有显著性(P<0.05)。3周后处死小鼠,联合组肿瘤组织中Survivin免疫组织化学评分最低,说明不同浓度药物处理后可下调肿瘤组织中Survivin的表达;空白组肿瘤组织中VEGF高表达(5.750±0.619),联合组肿瘤组织中VEGF呈低表达(2.000±0.326);空白组肿瘤组织中Fas表达较低,经药物处理组Fas呈不同程度的高表达,且以联合组中表达最高。对于每一种指标,比较处理组与空白组的IHS评分,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:1 HMG-CoA还原酶抑制剂洛伐他汀具有抑制B16细胞增殖的作用,其抑制B16细胞增殖的作用呈时间-剂量依赖关系。2洛伐他汀可协同顺铂对B16细胞的增殖抑制作用。3洛伐他汀可通过下调Survivin、VEGF的表达而发挥其抑制B16细胞增殖、浸润和转移的作用。4洛伐他汀可通过上调Fas的表达而诱导B16细胞凋亡。5 VEGF表达与Survivin表达呈正相关,VEGF表达与Fas表达呈负相关,Survivin表达与Fas表达呈负相关。6洛伐他汀可强化顺铂诱导B16细胞凋亡的作用,推测洛伐他汀可增加B16细胞对化疗药的敏感性。