耐碱基因EcNH转化大豆的研究

来源 :吉林农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:pjliuchuang
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吉林省素有“大豆之乡”的美称,大豆种植面积大,产量高,但是吉林省中西部地区大面积的苏打盐土极大地影响了大豆的生长和分布,限制了大豆的种植和产量提高。如何提高大豆耐碱性,有效利用苏打盐碱地,是目前大豆育种研究的一个重要课题。传统育种方法由于缺乏有效的耐碱种质资源,加之育种年限长,进展较为缓慢。本研究应用转基因技术,通过农杆菌介导的大豆子叶节高效遗传转化法将大肠杆菌耐碱基因EcNH导入大豆栽培品种Williams 82中,对大豆进行定向改造以提高大豆耐碱性,获取大豆耐碱转基因新材料,为耐盐碱转基因大豆新品种培育奠定了基础。主要结果如下:(1)对EcNH基因进行了生物信息学分析,EcNH基因来源于大肠杆菌,属于Na+/H+逆向转运蛋白基因,基因全长1179bp,可编码388个氨基酸,蛋白分子质量为41k Da。该蛋白具有11个跨膜螺旋区,在200-300氨基酸处有一个典型的亲水性区域。(2)使用Xba I酶和EcoRI酶进行酶切,构建了植物表达载体p TF101.1-EcNH。在研究中,选用了农杆菌EHA101菌株进行侵染试验,共侵染大豆外植体5320个,获得转化幼苗360株,植株再生率约为6.8%。(3)利用PCR、RT-PCR、Southern杂交和bar试纸条等方法对获得的转化植株进行了检测,共获得阳性转基因植株125株,植株转化率约为2.3%。(4)对转基因大豆进行耐碱性鉴定。对T3代转基因大豆和普通大豆进行了Na HCO3(60mmol·L-1)胁迫处理,分别测定了二者叶绿素含量、胞间CO2浓度(Ci)、蒸腾速率(E)、气孔导度(Gs)、净光合速率(Pn)等光合参数,和丙二醛(MDA)、脯氨酸(PRO)、可溶性蛋白、可溶性糖等含量以及过氧化物酶(POD),过氧化物酶(CAT),超氧化物歧化酶(SOD)等酶活性。结果显示在碱胁迫下,转基因植株叶片通过增强对弱光的吸收利用来保持较高的光合效率,光合效率显著高于对照植株;转基因植株叶片和根部分泌大量的渗透调节物质,尤其是根部脯氨酸和可溶性蛋白积累显著高于对照;转基因植株SOD、POD和CAT酶活性较对照植株显著升高,转基因植株体内丙二醛含量显著低于对照。研究结果表明转基因植株耐60mmol·L-1 Na HCO3,其耐碱性显著高于对照植株。
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