论文部分内容阅读
本论文针对分子检测的灵敏性及可操作的关键问题,将复合纳米粒子和葡萄糖(GOx)巧妙结合构建信号放大新方法。利用复合纳米粒子高表面积特性,使表面局部富集高浓度的引发剂,从而快速引发氧化还原聚合产生信号放大,实现裸眼可视化检测生物分子及提高检测灵敏性；GOx在葡萄糖分子存在下,消耗空气中的氧,产生的过氧化氢与富含维生素C表面的复合纳米粒子形成氧化还原引发体系引发单体原位聚合,达到可视化放大效果。复合纳米粒子和GOx的连锁放大实现了空气中的操作和提高检测灵敏性的多重目的,具体工作如下：1、复合纳米粒子的构建：通过可逆加成-断裂链转移聚合(RAFT)合成两亲性嵌段聚合物聚维生素C丙烯酸酯-嵌-聚苯乙烯(PAAA-b-PS)和维生素H封端的聚乙二醇-嵌-聚苯乙烯(biotin-PEG4ooo-b-PS),并采用动态光散射(DLS)和透射电镜(TEM)等对两种聚合物的共自组装行为进行了研究,最终制备了以聚苯乙烯为疏水内核,以聚维生素C丙烯酸酯和维生素H封端的聚乙二醇为亲水外壳的复合纳米粒子。利用纳米粒子比表面积大的特点,在亲水外壳富集具有还原性的维生素C,可与双氧水组成氧化还原对,复合纳米粒子表面的维生素H作为分子识别的连接纽带。2、构建双氧水-复合纳米粒子(H2O2-NP)氧化还原聚合信号放大方法,并对模型DNA和人体p53基因片段进行检测,实现对模型DNA的检测浓度达100fM(0.3amol)及p53基因的检测浓度10pM(30amol),表面聚合产生信号放大的时间为30 min。3、将复合纳米粒子与GOx相结合,利用近红外优化GOx和葡萄糖等聚合条件。在GOx为1.0 mg/mL,葡萄糖为250 mg/mL的条件下,对模型DNA的检测灵敏度达10fM(0.15amol)及p53的检测灵敏度5pM(15amol),表面聚合产生信号放大的时间为40 min。