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目的:探索TLR4（Toll like receptor 4,TLR4）基因敲除对老年小鼠肥胖的影响及其相关机制。方法:将60只雄性野生型小鼠（wild type,WT;C57BL/10Sc N）与60只雄性TLR4基因敲除(TLR4 knockout,TLR4-/-;C57BL/10Sc N background)小鼠按照年龄分为青年（6月龄）小鼠;中年（12月龄）小鼠;老年（18月龄）小鼠。每个年龄段分为2组:野生型组（WT组）和TLR4基因敲除型组(TLR4-/-组),每组20只小鼠。所有小鼠出生后21天断奶,标准饲料饲喂养。1、研究TLR4基因敲除对小鼠体重的影响:在6月龄、12月龄和18月龄记录小鼠体重、体长,称量小鼠皮下脂肪、肾周脂肪的重量,计算皮下脂肪指数、肾周脂肪指数和Lee`s index（反应小鼠肥胖程度）;HE染色观察脂肪和肝脏组织结构变化;油红O染色观察肝脏脂肪积累情况。2、研究TLR4基因敲除对老年小鼠脂类代谢的影响:实时荧光定量PCR检测肝脏和脂肪组织中中糖脂代谢基因Leptin、脂联素（Adiponectin,Adipoq）、Srebp1c、碳水化合物反应元件结合蛋白（Carbohydrate-responsive element-binding protein,Ch REBP）的mRNA表达情况;Western blot检测肝脏中Adipoq、Ch REBP蛋白的表达情况。3、研究TLR4基因敲除对老年小鼠肝脏中炎症的影响:实时荧光定量PCR检测肝脏炎症因子IL-1β、IL6、IL10 mRNA和M1（M1 type macrophage,M1）型巨噬细胞marker基因CD86,M2（M2 type macrophage,M2）型巨噬细胞marker基因CD163的mRNA表达情况;免疫组化检测肝脏中CD86、CD163的免疫反应性。4、研究TLR4基因敲除对老年小鼠肝脏中My D88和TRIF信号通路的影响:实时荧光定量PCR检测肝脏中TLR4相关通路基因S100A8、S100A9、髓样分化因子88（Myeloid differentiation primary response protein 88,My D88）、干扰素TIR结构域衔接蛋白（Toll/IL-1 receptor domain-containing adaptor,TRIF）、干扰素调节因子3（Interferon regulatory factor 3,IRF3）mRNA表达情况;Western blot检测肝脏中TRIF、p IRF3蛋白的表达情况;免疫组化检测肝脏中TRIF、p IRF3蛋白表达情况。5、研究TLR4基因敲除对老年小鼠脾脏中辅助T（T helper,Th）细胞分化的影响:在6月龄、12月龄和18月龄时称量小鼠的脾脏重量,计算脾脏指数;实时荧光定量PCR检测脾脏中Tbet、Gata3、Rorγt、Foxp3、IL2、IL4、IL17a、IL10 mRNA的表达情况;Western blot检测Tbet、Gata结合蛋白3（GATA binding protein 3,GATA3）、维甲酸相关核孤儿受体γt（Retinoid-related orphan receptor-γt,Rorγt）、Foxp3蛋白的表达情况;免疫组化检测脾脏中Tbet、Gata3、IL17a、Foxp3蛋白的表达情况。6、研究TLR4基因敲除对老年小鼠血清中炎症因子和Leptin分泌的影响:ELISA检测18月龄WT和TLR4-/-小鼠血清中IL1β、IL6、IL10和Leptin的蛋白表达情况。结果:1、6月龄、12月龄和18月龄TLR4-/-小鼠体重增加;但是6月龄TLR4-/-小鼠皮下脂肪和肾周脂肪指数下降;12月龄和18月龄TLR4-/-小鼠皮下脂肪和肾周脂肪指数升高了;12月龄TLR4-/-小鼠Lee`s index没有变化,但18月龄TLR4-/-小鼠Lee`s index升高;HE染色结果显示老年TLR4-/-小鼠肝脏中展现出更多的空泡样结构,皮下脂肪和肾周组织直径增大;油红O染色显示老年TLR4-/-小鼠肝脏展现出更多的脂肪蓄积。2、18月龄TLR4-/-小鼠肝脏中致脂基因Ch REBP的mRNA表达升高,同时脂肪因子Adipoq的mRNA表达下降;18月龄TLR4-/-小鼠肾周脂肪和皮下脂肪组织中Ch REBP、Leptin的mRNA表达升高,同时Adipoq的mRNA表达下降;18月龄TLR4-/-小鼠中Ch REBP蛋白表达升高,同时Adipoq蛋白表达下降。3、18月龄TLR4-/-小鼠肝脏中IL1β、CD86的mRNA表达升高,IL10、CD163的mRNA表达下降;18月龄TLR4-/-小鼠增加了肝脏中CD86阳性的巨噬细胞数量,同时减少了CD163阳性的巨噬细胞数量。4、18月龄TLR4-/-小鼠肝脏中TRIF的mRNA表达增加,TRIF和p IRF3蛋白表达增加;同时18月龄TLR4-/-小鼠肝脏中增强了p IRF3的免疫反应性。但是18月龄TLR4-/-小鼠肝脏中S100A8、S100A9、My D88 mRNA表达并没有改变。5、18月龄TLR4-/-小鼠脾脏组织中Tbet、Rorγt、IL2、IL17a的mRNA表达升高,GATA3、Foxp3、IL4的mRNA表达下降;18月龄TLR4-/-小鼠脾脏中Tbet、Rorγt蛋白表达水平升高,Gata3、Foxp3蛋白表达水平下降;同时,18月龄TLR4-/-小鼠脾脏中增强了Tbet、IL17a蛋白的免疫反应性,减弱了Gata3、Foxp3蛋白的免疫反应性;18月龄TLR4-/-小鼠血清中炎症因子IL6和Leptin蛋白表达升高。结论:1、TLR4基因敲除能诱发老年小鼠自发性肥胖。2、TLR4基因敲除增加了致脂基因Ch REBP的表达并且影响了老年小鼠肝脏和脂肪组织中脂类代谢。3、TLR4基因敲除诱发了老年小鼠肝脏炎症,其可能机制为通过激活TRIF信号转导通路从而促进了抗炎型巨噬细胞M2向致炎型巨噬细胞M1极化4、TLR4基因敲除增大老年小鼠的脾脏指数并通过打破了脾脏中Th1/Th2和Th17/Treg细胞的平衡产生了慢性低度的炎症。