【摘 要】
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中对长小蠹Platypus parallelus是长小蠹科中最具侵略性的物种之一,研究显示其已在海南等地定殖,并有成为优势种的趋势,对我国重要战略资源橡胶树具有重大潜在危害。使用行为调控剂对小蠹虫进行监测和诱杀是小蠹虫防控的重要手段。为通过分子生物学方法筛选中对长小蠹行为调控剂,探究中对长小蠹气味结合蛋白功能,本文构建了中对长小蠹成虫转录组,鉴定分析中对长小蠹气味结合蛋白,并进行了体外原核表达、荧
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中对长小蠹Platypus parallelus是长小蠹科中最具侵略性的物种之一,研究显示其已在海南等地定殖,并有成为优势种的趋势,对我国重要战略资源橡胶树具有重大潜在危害。使用行为调控剂对小蠹虫进行监测和诱杀是小蠹虫防控的重要手段。为通过分子生物学方法筛选中对长小蠹行为调控剂,探究中对长小蠹气味结合蛋白功能,本文构建了中对长小蠹成虫转录组,鉴定分析中对长小蠹气味结合蛋白,并进行了体外原核表达、荧光竞争结合实验、分子对接实验,为研发中对长小蠹引诱剂及综合防治提供理论基础:1.从中对长小蠹转录组中筛选到78个嗅觉相关基因,分别为39个ORs基因,14个OBPs基因,11个CSPs基因,8个IRs基因和6个SNMPs基因。2.对中对长小蠹气味结合蛋白序列分析,鉴定到12个具有完整开放阅读框的OBPs,包括7个Classic OBP,3个Minus-C OBP,2个Plus-C OBP。Ppar OBP1开放阅读框长399 bp,其N基端具有20个氨基酸残基的信号肽,包含4个保守的半胱氨酸位点,符合Minus-C OBP的特征。Ppar OBP2开放阅读框393bp,其N基端具有21个氨基酸残基组成的信号肽,包含6个保守的半胱氨酸位点,是Classic OBP。3.使用原核表达的方法,获得了重组蛋白p ET30a（+）-Ppar OBP1和p ET30a（+）-Ppar OBP2。并且在温度为28℃、诱导时间9 h和IPTG浓度0.1 mmol/L的条件下得到可溶的重组蛋白。4.荧光竞争结合测定结果表明,Ppar OBP1与长叶烯有强结合能力,与α-蒎烯有较弱结合能力,月桂烯、α-蒎烯与Ppar OBP2结合能力强,2-甲基-3-丁烯-2-醇、（S）-顺马鞭草烯醇、2-苯基-2-丙醇、莰烯与Ppar OBP2有较弱结合能力。5.通过SWISS-MODEL构建了Ppar OBP2蛋白模型,其三维结构通过多个在线网站评价证明了合理性符合分子对接的要求。分子对接结果显示,Ppar OBP2与月桂烯、α-蒎烯有结合性,并且没有产生氢键。疏水性氨基酸VAL99、ILE102、HIS103,在对接中均参与了与两个化合物的相互作用。
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