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目的:血管性痴呆(vascular dementia, VD)是由各种脑血管疾病导致的获得性、持续性智能障碍综合征,是老年期痴呆的重要病因。随着社会人口日益老龄化,和抢救脑血管病存活率的提高,由脑血管病造成的精神及智能损害日益突出。尽管血管性痴呆的发病率低于阿尔茨海默病(Alzheim- er’s disease,AD),但就临床实际意义而言,VD较之AD可能更有预防和治疗价值。因此,对VD的防治近年来备受人们的关注。目前认为,慢性脑灌注不足是VD发病的主要病因,中枢胆碱能系统与认知功能直接相关,其中以基底前脑胆碱能系统与认知功能的关系尤为令人注目。基底前脑对缺血缺氧的耐受性很低,在血供障碍时胆碱能神经元极易受损使其合成和释放乙酰胆碱的能力下降,造成突触后乙酰胆(acetylcholine,Ach)受体的结构及功能发生适应性改变,与受体亚型相联系的毒蕈碱及烟碱信号转导通路也出现紊乱,如位于信号转导通路中游的蛋白激酶C (protein kinase C,PKC)等分子的磷酸化水平发生改变,PKC的磷酸化水平能影响神经元突触可塑性和神经网络的形成,最终可能影响整体认知功能。国内外实验证明,PKC在AD疾病发生发展过程中起重要作用,但PKC在VD中的作用尚未见报道,此外,作为改善智能障碍的一线药物,盐酸多奈哌齐已广泛应用于VD的临床治疗,但其治疗VD的药理机制却尚在探讨中。因此本实验通过建立VD模型,观察其海马PKC的变化及盐酸多奈哌齐改善智能的药理机制。方法:本研究分为三部分。第一部分以昆明小鼠为研究对象,采用双侧颈总动脉丝线结扎方法、经连续三次反复缺血-再灌注,制备VD模型,并设立假手术组、药物组(盐酸多奈哌齐组);造模术后第29 d、30 d,利用跳台试验和水迷宫试验对各组小鼠分别进行学习和记忆成绩测试,并观察小鼠行为学差异。第二部分以4 %多聚甲醛溶液固定的小鼠脑组织为研究对象,经HE染色后观察各组小鼠海马组织的病理改变。第三部分采用免疫组化技术,在光镜下观察各组小鼠海马组织PKC的表达变化,并且计算其CA1区PKC阳性细胞平均光密度值,比较各组PKC表达量是否存在差异。结果:(1)跳台试验:模型组小鼠学习、记忆成绩显著下降,表现为学习阶段的反应时间延长(P<0.05)、错误次数增加(P<0.05),记忆阶段的潜伏时间缩短(P<0.05)、错误次数增加(P<0.05);药物组较模型组学习、记忆成绩明显改善(P<0.05),并且与假手术组比较无差别(P>0.05)。(2)水迷宫试验:模型组小鼠学习、记忆成绩也显著下降,表现为学习阶段的游全程时间延长和错误次数增加(P<0.05),记忆阶段的游全程时间延长和错误次数增加(P<0.05);药物组较模型组明显改善(P<0.05),并且与假手术组之间无差别(P>0.05)。(3)海马HE染色:假手术组海马HE染色显示海马轮廓清楚、锥体细胞3～5层,数量丰富,排列规则致密,细胞核圆而大,核仁清晰;模型组海马CA1区锥体细胞层次减少,排列松散,锥体细胞数目减少,细胞核体积变小,深染,结构不清,呈核固缩表现;而药物组病理改变明显减轻。(4)海马PKC表达变化:在光镜下,假手术组海马CA1区层次清楚,有大量的阳性神经元,排列紧密,呈棕黄色,胞体较大,圆形或椭圆形,有的可见突起。而模型组阳性神经元数目明显减少,排列松散,染色较淡。药物组可见阳性神经元数目较模型组增多,排列较紧密,染色变深。经过计算阳性细胞平均光密度值发现,与假手术组比较,模型组小鼠海马PKC阳性神经元平均光密度值降低(P<0.05),而药物组PKC阳性神经元平均光密度值增加,与模型组比较有差别(P<0.05),并且与假手术组无差别(P>0.05)。结论:(1)本实验成功地建立了小鼠VD模型,经过跳台试验、水迷宫试验证实VD小鼠存在学习和记忆能力障碍,能够基本模拟临床上VD的智能障碍。(2)海马HE染色显示海马锥体细胞受损,是比较理想的VD动物模型;同时,盐酸多奈哌齐也取得了相应的治疗效果。(3)采用免疫组化技术,证实了海马组织PKC的表达减少参与了VD的认知功能损害;盐酸多奈哌齐可以通过减少Ach的降解,改善VD的临床症状。