2015年以来,我国出现了一种由鹅源星状病毒(goose astrovirus,GAst V)导致的以病鹅关节和内脏器官尿酸盐沉积为典型症状的疾病,给养鹅业造成严重经济损失。目前针对该病尚无非常有效的治疗措施及疫苗,防治重点在于疫情的早期诊断和监控。因此本研究从分析安徽省部分地区GAst V的遗传多样性和建立快速检测方法两方面开展了试验,为GAst V的流行病学调查和早期诊断提供了技术支持。为了更好地了解安徽地区GAst V流行情况,本研究以32份来自安徽部分地区的具有痛风症状的雏鹅肝脏和肾脏临床组织为样品象,RT-PCR检测出6份GAst V阳性样品。设计14对特异性引物,PCR扩增其中5株GAst V全基因序列,命名为AHAU1、AHAU2、AHAU3、AHAU4、AHAU5,提交至Gen Bank,并进行核苷酸相似性和遗传进化分析。结果显示,扩增的5株GAst V与GAst V参考毒株之间的相似性为97.4%-99.2%,与SDPY株的核苷酸序列相似性最高,达到99%。遗传进化分析结果显示,AHAU1和AHAU4与参考毒株SDPY(MH052598)在同一分支,有较高的亲缘关系;AHAU2、AHAU3和AHAU5形成了单独的分支。为快速、准确地诊断GAst V,本研究针对GAst V ORF2基因保守区域设计引物,通过优化反应条件和体系,建立了SYBR Green荧光定量RT-PCR和RT-LAMP两种检测方法。SYBR Green荧光定量RT-PCR试验结果显示,除GAst V外,禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)、血清4型禽腺病毒(Fowl adenovirus serotype 4,FAd V-4)、鸡传染性喉气管炎病毒(Avian Infectious Laryngotracheitis virus,ILTV)、鹅细小病毒(Goose parvovirus,GPV)和传染性支气管炎(Avian infectious bronchitis virus,IBV)等利用该方法检测均呈阴性,特异性高;最低检测限为37.5拷贝/μL,敏感性是普通RT-PCR的100倍;组内组间变异系数均小于1%,重复性良好。利用该方法对32份临床样品进行检测,阳性检出率比常规RT-PCR高25%,两种方法检测的阳性符合率为42.85%,表明该方法可用于临床样品的检测?RT-LAMP试验结果显示,60℃条件下水浴60min便可完成检测;与FAd V-4、ILTV、ALV、GPV和IBV等病毒无交叉反应;敏感性与巢式RT-PCR相当;对32份病鹅肝脏和肾脏临床样本进行了检测,RT-LAMP阳性检出率比巢式RT-PCR高9.33%。综上所述,本研究对安徽部分地区GAst V进行了遗传进化分析,同时建立了两种快速检测方法。将有助于更好地了解安徽地区GAst V的遗传进化情况,同时丰富了GAst V数据支撑,也为GAst V的快速诊断奠定了一定的基础。