草鱼（Ctenopharyngodon idellus）作为重要的淡水养殖经济鱼类，病害较多，其中以草鱼出血病最严重，草鱼出血病是由草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus，GCRV)引起的一种高度传染性、致死性的病毒性传染病，给养殖业带来巨大的损失。此外，草鱼病害的发生，必然导致药物的大量使用，进而影响环境公共卫生和安全食品安全。因此，建立对该病毒的快速、有效的检测诊断方案势在必行。本实验首先对GCRV的宿主草鱼肾组织细胞系（CIK）扩增的条件进行了探索，为获得具有中和GCRV作用的单克隆抗体，又对长期体外培养及传代的GCRV的毒力进行了研究，最后，利用单克隆抗体技术制备了抗GCRV单克隆抗体，为建立快速、有效的检测GCRV的方案奠定了良好基础。具体研究结果如下：（1）草鱼肾组织细胞系的培养。本实验利用CIK细胞作为GCRV的宿主对其进行培养，CIK细胞用含10%新牛血清的MEM培养液培养，温度控制在28℃，CO2浓度为2%。为使CIK细胞快速扩增，本实验探索了能使其扩增的条件，主要探索了小鼠腹腔、胸腺、脾脏细胞悬液，对CIK细胞的促增长作用。首先，收集3周、4周龄Balb/C小鼠腹腔、胸腺、脾脏细胞悬液，培养不同时间后取上清液，用于CIK细胞的培养，研究结果表明，腹腔细胞培养上清液对CIK细胞无显著促增殖作用，胸腺、脾脏细胞培养上清液能明显促进CIK细胞增殖，且与三种细胞悬液的培养时间及小鼠的周龄无关。从而获得了促使CIK细胞扩增的条件，并为其培养条件的优化提供理论依据。（2）草鱼呼肠孤病毒毒力的检测。抗GCRV单克隆抗体是建立病毒检测及诊断方案的基础，在研究过程中，需要利用CIK对GCRV长期培养及传代，以获得大量的病毒，因此GCRV的毒力是保证我们制备抗体以及利用该抗体制备不同的免疫试剂盒是否成功的关键，因而我们对长期体外培养及传代的GCRV的毒力进行测试与探索。将不同培养时间及传代次数的病毒稀释后，感染健康草鱼，取感染后具有典型症状的草鱼肾脏组织液，对健康草鱼进行重复感染，对其致病和致死率进行统计；研究结果表明，体外长期培养（＞8d）能导致GCRV的外衣壳脱落，但并不影响草鱼呼肠孤病毒的毒力，且体外传代（1～50代）对草鱼呼肠孤病毒的毒力也无影响。（3）抗GCRV单克隆抗体的制备。以纯化的GCRV为抗原免疫Balb/C小鼠，利用间接免疫荧光法检测抗血清，无菌条件下将免疫小鼠的脾脏细胞和SP2/0细胞融合，间接免疫荧光法筛选阳性杂交瘤细胞，利用有限稀释法克隆阳性杂交瘤细胞，共获得6株抗GCRV的单克隆抗体杂交瘤细胞株：4C8、5F11、5C8、2A4、4D9和1H11，小鼠体内诱生腹水获得并保存了4C8、5F11、5C8、2A4、4D9和1H11分泌的抗体，并利用辛酸一硫酸铵法对腹水进行了纯化。（4）抗GCRV单克隆抗体的应用。取典型GCRV引起的草鱼出血病的草鱼肾脏，制备了病鱼肾脏冷冻切片，利用制备的抗GCRV单克隆抗体5F11进行间接免疫荧光检测。结果显示病鱼肾脏切片的细胞处呈现出了明亮的点状绿色荧光，而正常草鱼肾脏切片不显明亮的绿色荧光，说明本实验制备的抗体能特异性抗GCRV，为建立快速、有效的检测GCRV的方案奠定了良好基础。结论：本实验通过体内与体外相结合的方式测定了GCRV的毒力，该病毒在本实验室的培养下，仍具有较强的毒力作用；利用该病毒作为抗原制备的单克隆抗体4C8、5F11、5C8、2A4、4D9和1H11能特异性的抗GCRV。