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背景:胰腺癌是最恶性的实体肿瘤之一,具有复杂的发病,转移和侵袭机制。目前手术切除是治疗胰腺癌的主要手段,然而胰腺癌术后复发率极高,研究发现80%-90%的胰腺癌存在周围神经侵犯,且周围神经侵犯的发生往往早于血管和淋巴管转移,是导致胰腺癌早期转移和术后复发的主要原因。肿瘤微环境细胞之间的“信号交互作用”理论是周围神经侵犯的分子基础,而信号通路的紊乱是“信号交互作用”启动的关键始动因素。Hedgehog（HH）信号通路的异常激活是胰腺癌的早期特征性事件,上调神经营养因子,并与神经性疼痛呈正相关,是胰腺癌细胞与神经细胞发生交互作用的重要调控通路之一,其中GLI1基因的表达是HH信号激活的特征。外泌体是活细胞分泌的有脂质双分子层结构的囊泡,细胞可通过外泌体实现远距离运输介导肿瘤细胞与距离较远的细胞之间的信息交换。circ RNA作为胰腺癌重要的调节因子而被广泛研究,其最大的作用机制是竞争结合mi RNA。本文旨在研究Hedgehog信号通路对胰腺癌细胞CFPAC1的作用,并探索胰腺癌CFPAC1细胞通过外泌体远距与神经细胞进行信息交流,研究circ RNA在神经侵犯中承担的作用,促进周围神经侵犯和肿瘤细胞的转移,为胰腺癌神经转移的机制提供新的理论模式。目的:研究HH信号通路对胰腺癌增殖,迁移,侵袭的影响,探索HH信号通路和胰腺癌来源的外泌体在周围神经侵犯中的作用。方法:（1）通过慢病毒转染建立Gli1过表达的CFPAC1稳定转染细胞株及相应的空载体转染对照组,q RT-PCR及western-blot检测过表达效果;（2）CCK-8检测两组细胞株的增殖能力,transwell检测两组细胞株转移和侵袭的能力,q RT-PCR检测EMT相关基因E-钙粘蛋白,N-钙粘蛋白的表达。（3）基于Illumina技术测序平台,利用双末端测序（Paired-End）的方法,完成胰腺癌CFPAC1两组细胞的circ RNA测序,查找两组之间的差异circ RNA并通过生物信息分析HH信号通路参与PNI的具体分子机制。（4）离心提取CFPAC1两组细胞系上清外泌体,透射电镜、western-blot,nanoparticle tracking analysis（NTA）多种方法鉴定获取的外泌体。（5）将外泌体提取纯化,过滤后与大鼠背根神经节细胞（DRG）共培养进行示踪实验,同时共培养48h后,收取神经细胞的RNA,q RT-PCR检测神经侵犯相关的基因表达和circ RNA表达。（6）transwell趋化实验观察HH过表达组和对照组对DRG的趋化作用。结果:（1）q RT-PCR显示过表达组与对照组中Gli1 m RNA的表达差异具有统计学意义,Western blot检测Gli1在过表达组中蛋白表达量高于对照组;（2）Gli1过表达后,CCK-8增殖实验结果显示,过表达组的增殖能力增强,差异有统计学意义（p＜0.05）;transwell结果显示,过表达组迁移和侵袭能力显著增强（p＜0.05）。q RT-PCR,western-blot检测EMT相关基因E-钙粘蛋白,N-钙粘蛋白的表达,其差异在过表达组和对照组中有统计学差（p＜0.05）。（3）通过q PCR检测相关趋化因子相应受体在CFPAC1细胞中的表达,结果显示RET在两组细胞中表达有统计学差异（p＜0.05）,其配体是GDNF。CFPAC1两组细胞高通量测序结果显示有1530个差异circ RNA,取FPKM＞0,q＜0.05,log2fold change＞2的circ RNA共30个,通过circ Base数据库查到这30个circ RNA的来源基因。通过真核生物启动子数据库EPD（https://epd.epfl.ch//index.php）查找到调控序列中含有GLI1结合元件“GACCACCCA”的基因,然后取两者交集,得到新的circ RNA数据集,通过circ Intercatome数据库预测与新的circ RNA数据集结合的mi RNA.通过Star Base数据库查找到与GDNF m RNA相结合的mi RNA,取新circ RNA数据集结合的mi RNA和GDNF m RNA结合的mi RNA,最终得到了与GLI1作用的circ RNA和mi RNA。（4）将离心的获得物进行电镜下观察,获得物形状为茶托状,边缘透明,具有完整的囊泡结构;western-blot显示外泌体标志蛋白CD63呈阳性表达,阴性对照Calnexin在细胞系中呈阳性表达,在获得物中无表达;NTA分析显示,两组细胞获得物大小在130nm左右,以上结果均与目前文献中外泌体的特征符合,说明我们获得的物质确为外泌体无疑。（5）外泌体示踪实验发现,CFPAC1分泌的外泌体进入了神经细胞中。q RT-PCR分别检测GDNF在3组大鼠背根神经节细胞（OE外泌体共培养组DRG-OE,NC外泌体共培养组DRG-NC,DRG空培养组）和相应受体RET在CFPAC1细胞系中的表达,发现GDNF在CFPAC1-OE外泌体-大鼠背根神经节细胞共培养组中和CFPAC1-NC外泌体-大鼠背根神经节细胞共培养组之间有统计学意义（p＜0.05）,空白对照组与两组之间均存在统计学意义（p＜0.05）,说明胰腺癌细胞CFPAC1来源的外泌体能促进DRG细胞中GDNF的表达,但在HH过表达的共培养组中,胰腺癌细胞对DRG中GDNF的上调作用更强。相关的circ RNA在CFPAC1两组的表达具有统计学差异（p＜0.05）。（6）Transwell趋化实验显示,OE组穿过小室膜的DRG比对照组多（p＜0.05）,说明HH过表达的CFPAC1对DRG趋化作用更强。结论:HH信号通路显著增强了CFPAC1细胞系的增殖,迁移,侵袭能力,并通过外泌体与神经细胞信息交流,促进“神经重塑”,导致胰腺癌周围神经侵犯的发生发展。