目的:1.探讨中电导钙激活钾离子通道(IKCa1)对HeLa细胞增殖、迁移及侵袭特性的影响;2.探究IKCa1对miRNA表达谱的影响,筛选出与IKCa1相关的miRNA,并通过生物信息学预测其靶基因,对其靶基因进行功能分析(GO分析),筛选出差异显著的mi RNA,,对其靶基因进行信号通路富集分析,初步探索IKCa1相关miRNA与HeLa细胞增殖、侵袭及转移的相关关系,为进一步探究mi RNA在预防和治疗宫颈癌的靶标分子中提供了线索。方法:1.分别设置浓度为0、10.0、20.0、30.0、40.0μmol/L TRAM-34(IKCa1特异性阻断剂)为观察1-5组及等体积的DMSO组(TRAM-34溶剂)处理HeLa细胞24h、48h和72h,采用CCK8实验检测HeLa细胞增殖特性;采用划痕实验测量HeLa细胞实际迁移距离从而检测HeLa细胞迁移特性;2.按上述6组分组处理HeLa细胞48小时后用Transwell实验检测其侵袭特性;3.通过本研究前期预实验、查阅相关文献、结合CCK8实验及划痕实验结果筛选0.0、30.0μmol/L TRAM-34分别处理HeLa细胞48小时作为对照组和实验组,采用高通量测序方法检测IKCa1阻断前、后miRNA表达谱的变化;4.采用q RT-PCR法对部分差异显著表达miRNAs进行验证,从而验证高通量测序结果的准确性;5.运用mi Randa、miRWalK、Targetscan、DIANAmT、miRDB等软件预测筛选的差异显著表达miRNA可能调控的靶基因以及GO功能分析;再从表达谱中上调和下调的miRNA中各选一个与宫颈癌密切相关的mi RNA作为研究对象即为靶miRNA,对其靶基因进行信号通路富集分析。结果:1.CCK8实验提示TRAM-34抑制HeLa细胞的增殖,在一定范围内,具有剂量依赖性,在培养细胞24h时DMSO组、观察1组和观察2组三组间差异均不具有统计学意义(p>0.05),其余各组与DMSO组及与观察1组之间具有显著性差异(p<0.001);而培养HeLa细胞48、72h后,DMSO与观察1组间差异不具有统计学意义(p>0.05),而其余各观察组与观察1组、DMSO组之间差异均具有统计学意义(p<0.001),提示本实验中MDSO浓度对HeLa细胞无影响;划痕实验提示TRAM-34能抑制HeLa细胞迁移,在一定范围内,具有时间及剂量依赖性,随着浓度增加及作用时间延长,抑制迁移作用越明显(p<0.001))。2.Transwell侵袭实验证明,在一定浓度范围内,HeLa细胞的侵袭率随TRAM-34浓度增加呈递减趋势(F=384.050,p<0.001)。3.分析对照组与实验组的mi RNA高通量测序结果,通过对不同样本的Clear data的比较,分析其共有序列及特有的序列,以Fold Change≧1.5,qvalue<0.01为差异显著表达的筛选标准,在871条差异表达中筛选出20个差异显著表达的mi RNAs,其中15个差异miRNA表达上调,5个差异miRNA表达下调。4.结合高通量测序结果及查阅相关文献,在15个表达上调的mi RNA中挑选4个(hsa-miR-451a、hsa-miR-122-5P、hsa-miR-143-3P、hsa-miR-223-3P)和5个表达下调的miRNA中挑选1个(hsa-mi R-421)进行qRT-PCR验证,结果显示hsa-miR-451a、hsa-miR-122-5P、hsa-miR-143-3、hsa-miR-421表达量的变化趋势与高通量测序的结果一致,在实验组与对照组中差异均具有统计学意义(P<0.05),从而检测高通量测序结果的准确性;5.通过生物信息学分析发现,差异显著的miRNA的靶基因主要富集蛋白结合,细胞代谢过程、运输过程等条目;其中hsa-miR-143-5P、hsa-mi R-421与多种肿瘤的发生、发展密切相关。通过对hsa-miR-143-5P、hsa-miR-421进一步行信号通路分析发现,hsa-miR-143--5P靶基因主要涉及到肿瘤蛋白多糖、p53信号通路、癌症相关通路及MAPK信号通路等过程,其中在p53信号通路、MAPK信号通路达到显著性富集水平(p<0.01);而hsa-mi R-421靶基因主要涉及到肿瘤蛋白多糖、Rap1信号通路和Wnt信号通路等过程,其中在Wnt信号通路达到显著性富集(p<0.01)。结论:推测IKCa1可通过影响相关mi RNAs表达,进一步影响其靶基因在p53/MAPK/Wnt信号通路上的调控,从而对HeLa细胞增值、迁移及侵袭产生影响。抑制IKCa1可抑制HeLa细胞增值、迁移和侵袭。