论文部分内容阅读
本文研究了生物制剂1α,25-二羟基维生素D3(calcitriol)对JAR细胞的增殖和分化的影响，探讨其作用机制，为绒毛膜癌诱导分化治疗提供一条新思路。
[方法]用不同浓度(10-8、107、10-6mol/L)calcitriol处理体外培养的绒毛膜癌细胞株JAR，分别在处理后不同的时间点(1d、3d、6d)，以MTT比色法检测calcitriol对JAR细胞增殖的影响；流式细胞仪检测calcitriol对JAR细胞周期的影响；光学显微镜下进行细胞形态学上观察；RT-PCR检测维生素D受体(VDR)mRNA水平的表达；WesternBlot检测VDR蛋白表达。
[结果]
1.1α，25-二羟基维生素D3抑制JAR细胞增殖MTT比色法检测calcitriol对JAR细胞增殖的作用，结果发现，随着calcitriol浓度的增加，相对于对照组而言，A值减少；随着时间的增加，同一浓度与对照组比较，A值减少，呈明显的时间—剂量效应关系。JAR细胞10-6mol/Lcalcitriol作用3d与对照组之间比较，差异有统计学意义(P＜0.05)，JAR细胞10-7、10-6mol/Lcalcitriol作用6d分别与对照组之间比较，差异均有统计学意义(P＜0.01)。计算出抑制率(IR)及半数抑制浓度(IC50)。
2.1α，25-二羟基维生素D3诱导JAR细胞分化流式细胞仪检测细胞周期，JAR细胞应用10-6mol/Lcalcitriol作用6天后(IC50组)，G1期细胞数百分比从47.78％增加到59.81％(P＜0.01)，S期细胞数百分比从54.6％减少到33.08％(P＜0.01)，表明calcitriol是通过G()G()期捕获抑制JAR细胞增殖。JAR细胞10-6mol/Lcalcitriol作用6天后，HE染色后光学显微镜下观察，与对照组比较，JAR细胞体积缩小，核/浆比下降，核型有不规则凹陷、扭曲，核分裂像减少。以上结果表明，calcitriol可诱导JAR细胞分化。
3.1α，25-二羟基维生素D3上调VDRmRNA表达应用RT-PCR检测VDRmRNA的表达，结果显示，IC50组与对照组VDRmRNA相对表达丰度分别为3.79±0.21、2.24±0.16，差异有统计学意义(P＜0.01)，calcitriol上调VDRmRNA表达。
4.1α，25-二羟基维生素D3上调VDR蛋白表达应用WesternBlot检测VDR蛋白表达，经BandScan4.3图像分析软件分析VDR/β-actin灰度比值，对照组与IC50组分别为100％±0.27，221％±0.31，差异有统计学意义(P＜0.01)，calcitriol在蛋白水平对JAR细胞VDR表达有上调作用。
[结论]Calcitriol能明显抑制绒毛膜癌细胞株JAR的增殖，并诱导其分化，其作用机制与calcitriol上调VDRmRNA，进而增加VDR蛋白的表达有关。深入研究calcitriol分子途径的作用机制有可能使其成为绒毛膜癌的诱导分化治疗的一个新靶点。