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本文从3日龄的SD大鼠头盖骨中分离获得成骨细胞(osteoblast，OB)，以分离培养的第2代OB作为研究对象，探讨了不同浓度的1α,25-(OH)2D3或/和硝苯地平(NIF)对OB增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性、骨钙蛋白(OCN)和钙离子水平的影响，为1α,25-(OH)2D3治疗骨代谢性疾病提供理论性的依据。
11α，25-(OH)2D3对体外培养OB骨钙蛋白的影响
利用改良的二次酶消化法分离3日龄SD大鼠头盖骨细胞，当细胞达到80％融合后传代。为研究1α,25-(OH)2D3对体外培养OB骨钙蛋白含量的影响，在培养液中添加不同浓度的1α,25-(OH)2D3(0、10-11、10-9及10-7 mol/L)作用于OB24、48、72h，采用ELISA试剂盒测定骨钙蛋白的含量。结果显示，在各时间点，1α,25-(OH)2D3均促进了OB骨钙蛋白的分泌，并且呈现出剂量依赖性，表明1α,25-(OH)2D3能够诱导OB提前进入矿化期。
21α，25-(OH)2D3影响体外培养OB增殖分化的机制
在体外培养SD大鼠头盖骨OB基础上，单独或联合添加不同浓度的1α,25-(OH)2D3和NIF后24、48、72h，MTT法测定OB的增殖率，PNPP法测定OB的ALP活性。结果显示，单独添加1α,25-(OH)2D3组，高浓度(10-9、10-7mol/L)能够显著或极显著抑制OB的增殖(P＜0.05或P＜0.01)，低浓度(10-11 mol/L)对OB增殖的抑制作用不显著。单独添加NIF(10-8 mol/L)能够抑制OB的增殖，联合添加1α,25-(OH)2D3和NIF组与对照组差异不显著(P＞0.05)，在24、48h，较10-9 mol/L1α,25-(OH)2D3组显著促进OB增殖(P＜0.05)。单独添加1α,25-(OH)2D3组，在作用的24、48、72h，OB ALP活性均有所增加，10-11及10-9mol/L组与对照组差异极显著(P＜0.01)，10-7 mol/L组在24h与对照组差异不显著。单独添加NIF(10-8 mol/L)组在48h与对照组差异不显著(P＞0.05)，在24、72h极显著促进ALP的分泌(P＜0.01)；而联合添加1α,25-(OH)2D3和NIF组，变化趋势与1α,25-(OH)2D3和对照组相一致。表明，1α,25-(OH)2D3能够抑制OB的增殖，其抑制机制可能与调控钙离子水平有关。
31α，25-(OH)2D3对OB内钙离子浓度的影响
在体外培养SD大鼠头盖骨OB基础上，单独或/和添加不同浓度的1α,25-(OH)2D3、NIF后20 min，流式细胞仪测定细胞内游离钙离子的浓度。结果表明，10-11mol/L1α,25-(OH)2D3组钙离子浓度显著低于对照组(P＜0.05)，10-9、10-7mol/L组显著或极显著高于对照组(P＜0.05或P＜0.01)；单独添加NIF组与对照组差异不显著(P＞0.05)；联合添加1α,25-(OH)2D3和NIF组钙离子浓度与对照组差异不显著(P＞0.05)，但较单独添加1α,25-(OH)2D3组显著降低(P＜0.05)。表明1α,25-(OH)2D3引起细胞内钙离子浓度升高的过程中，主要通过L-型钙离子通道调控来完成。