木质素降解菌的筛选和漆酶性质的研究

来源 :江西农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:suguoqing000
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
木质素作为农作物秸秆的主要组成部分,很难被降解,严重影响了牲畜对农作物秸秆的有效利用。本文旨在筛选一株分解木质素的木质素降解菌,并且对该菌株的木质素降解性能和木质素降解酶活性进行初步研究。具体如下:  1.菌株来源的样品菌群分析  本试验通过PCR-DGGE技术对菌株来源的样品菌群进行了分析。得出各样品中的菌群组成比较分散,共有菌群很少,只发现一株共有优势菌,经鉴定为枯草芽孢杆菌。  2.木质素降解菌的筛选及鉴定  本试验采用愈创木酚平板法和RB亮蓝平板法从样品白蚁肠道中成功筛选出一株产漆酶木质素降解菌,通过菌株形态学观察和16SrDNA序列分析,鉴定出该木质素降解菌为枯草芽孢杆菌。通过LB液体培养对Bacillus subtilis的生物学性质进行研究,得出该菌株的生长曲线;最适生长温度为37℃;在pH6.0-pH9.0范围内,菌株的生长没有较大的差异;具有一定的耐盐性和耐铜性。以ABTS(2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐)为底物对菌株漆酶活性进行测定,得出漆酶的最适酶活温度为60℃,在40℃-70℃范围内均具有较高的酶活;最适酶活pH为pH3.5-pH4.0;0.2mmol/L Cu2+对漆酶合成和活性有较好的诱导作用。通过LB液体发酵对菌株木质素降解性能进行研究,得出培养24 h菌液的木质素降解率可达到17.1%。但菌株对油菜秸秆的固体发酵,效果不理想。  3. CotA基因的克隆与异源表达  将枯草芽孢杆菌漆酶基因进行克隆,通过NCBI基因序列比对,得出该漆酶基因为枯草芽孢杆菌的芽孢漆酶CotA基因,该基因片段大小为1542bp。通过对CotA基因氨基酸序列和蛋白质分析,得出该基因编码513个氨基酸,含有起始密码子和终止密码子;CotA蛋白大小为58.4kDa,为亲水性蛋白,不含有信号肽,具有三个Cuprdoxins(铜氧还原素)结构区,属于多铜氧化酶超家族。将CotA基因克隆到表达载体pET-32a(+)上获得重组质粒pET-32a(+)-CotA并转化到BL21中进行表达,通过SDS-PAGE得出该重组蛋白大小为78.4kDa。通过酶活测定将表达条件进行优化,在IPTG浓度为1mmol/L,Cu2+浓度为0.3mmol/L,诱导时间为9h的条件下,漆酶蛋白活性可达到113.10U/L。
其他文献
1、设有跳汰活动筛板和腭板给料的动筛式跳汰机调节方法是:运转过程中测定腭板给料量和在筛板的作用下成层的床层的重量之比,根据所测出的值来调节跳 1, equipped with mov
在现阶段的数学教学过程中,创新教学模式,开展多元化教学方式,是提高学生数学学习热情的关键.当下应用最广泛的小组合作学习模式,充分调动了学生的积极性和自主探究的能力.因
不解思维是学生在学习、考试过程中,不能解决,或不能正确解决给定问题,得出正确答案的思维过程,也可叫做无效思维。在这个过程中,学生已经进行了很多思维,却得出了错误的结论或片面的结论。学生在思维过程中,有时已明确地意识到了自己缺少这方面的认知,得出的结论一定会错,也有时意识到了自己对问题的看法有些片面,可能会错,有所怀疑,但很多时候意识不到自己会错,对给出的答案满有信心。不解思维要与因智障、智商低,不
6月4日,国务院正式印发了《国务院关于促进市场公平竞争维护市场正常秩序的若干意见》(国发〔2014〕20号,以下简称《意见》),针对当前我国市场监管面临的新形势、新任务、新
随着素质教育的发展,游戏化教学逐步深入到小学数学教育当中.从学生的年龄特点来说,游戏化教学是更适合小学生的教学方式,学生好奇心强,注意力集中度不高,而游戏化的教学可以
在小学语文教学中,阅读占据很大的比例,阅读能力是语文素养的一种重要表现,通过阅读文章,学生去获取文章中的信息,以自身感受和常识去理解作者的想法.在小学语文阅读能力的训
兴趣是最好的老师,在地理教学中,提高教学成绩,培养学生学习地理的兴趣,无疑是一条重要的途径.在中学地理教学中,教师要优化地理教学方法,激发学生的地理学习兴趣,使学生获得
摘要: 在素质教育背景下如何实施生物教学是每个教师应关注的问题。本文就生物教学中的研究性学习进行了研究,以使研究性学习能更好地提高学生的素质。  关键词: 生物教学 研究性 素质教育    素质教育是指依据人的发展和社会发展的实际需要,以全面提高全体学生的基本素质为根本目的,以尊重学生的主体性和主动精神、注重开发人的智慧潜能、注重健全人的个性为根本特征的教育。素质教育的关键在于改变传统教育的注入式
本文通过对荣华二采区10
摘要: “快乐”教学已经成为当代教育界正深入探讨的热门课题。当学生喜欢某种活动时,他们便会全情投入,还会获得最高的学习效率和最好的学习效果。因此,在课堂教学中,就必须为学生创设快乐的学习环境,激发浓厚的学习兴趣,以兴趣促进学生乐学,达到学习的自动化,从而提高课堂教学效率。  关键词: 思品课堂 快乐教学 学习兴趣    思想品德课往往被认为是一门讲大道理、讲空话、为思品需要而进行宣传教育的一门课程