B组轮状病毒核酸杂交检测方法的建立及其初步应用

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人B组轮状病毒(group B rotavirus,GBRV)由我国洪涛1983年首次发现,主要感染成年人,在我国多次引起大规模的暴发性腹泻的大流行。人群B组轮状病毒抗体水平调查结果显示,其他国家和地区人群中都检测到滴度不同的B组轮状病毒抗体。除了中国之外,在周边国家印度、孟加拉等国也相继从散发的霍乱样腹泻病例中检测到B组轮状病毒。本研究旨在建立一种方便、快捷、灵敏高、特异性强的检测技术和方法,用于B组轮状病毒的检测,有助于深入研究B组轮状病毒的生物学特征、流行病学规律、检测技术以及防治措施等。用PCR法对B组轮状病毒nsp5基因作同位素标记,测试探针的灵敏度和特异性,并用于检测腹泻样本。结果显示探针灵敏度达500pg,特异性好,不与无关的基因产生杂交信号。检测来源于武汉市的94例腹泻标本,其中阳性一例,用RT-PCR和序列测定的方法对该检测结果进行了验证。根据B组轮状病毒ADRV的vp7基因序列设计合成引物,在上、下游引物5’端标记生物素,用PCR法制备GBRV vp7基因片段的生物素标记探针,灵敏度达50ng,用同样的方法制备了地高辛标记探针,灵敏度达10ng,特异性好。本研究所采用的核酸杂交方法可用作B组轮状病毒的初筛,也可用来验证其它方法的检测结果,或是用于B组轮状病毒的流行病学研究。
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