滋阴填髓益脑法对大鼠局灶性脑缺血—再灌注慢性损伤保护机理的研究

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目的:通过滋阴填髓益脑法对局灶性脑缺血大鼠行为、脑组织形态学和神经生化标志物的实验研究,揭示滋阴填髓益脑法对大鼠局灶性脑缺血-再灌注的作用及其机理。方法:1.选用雄性Sprague-Dawley大鼠,SPF级,体重250g-280g,按随机化原则,分为5组,分别为假手术组、模型组、滋阴填髓益脑方组、补阳还五汤组、尼莫地平组,每组15只。假手术组做动脉分离手术,不栓塞大脑中动脉。模型组,滋阴填髓益脑方组,补阳还五汤组,尼莫地平组均行大脑中动脉栓塞术。滋阴填髓益脑方、补阳还五汤、尼莫地平分别按照每日70kg成人121g、80g、90mg药量计算。大鼠大脑中动脉栓塞术后24小时开始灌胃对应组药物,连续灌胃7天,每日一次,给药量分别为滋阴填髓益脑方10.8g/kg,补阳还五汤7.15g/kg,尼莫地平8.0mg/kg(均以生药量计算),假手术组和造模组分别以等量生理盐水10ml/kg灌胃。最后一次给药后30min断头取脑。2.结果观察,1)脑梗死体积的测定;2)组织病理学观察;3)血清T-SOD及Cu-Zn-SOD测定;4)血清丙二醛(MDA);5)Bcl-2、Bax免疫组化染色;6)神经细胞凋亡检测(TUNEL法)。结果:1:显示滋阴填髓益脑方,补阳还五汤,尼莫地平均有减小梗死体积的作用,但尼莫地平该作用弱于滋阴填髓益脑方与补阳还五汤。2:脑组织病理学检查:滋阴填髓益脑方,补阳还五汤组明显优于模型组;3:滋阴填髓益脑方组明显增加T-SOD活性,降低MDA含量;4:对损伤后脑组织Bcl-2、Bax表达影响:滋阴填髓益脑方组、补阳还五汤组、尼莫地平组Bcl-2表达上升明显,Bax表达下降,Bax/Bcl-2明显低于缺血再灌组(P均<0.01)。其中滋阴填髓益脑方组Bax/Bcl-2下降较补阳还五汤组、尼莫地平组更为明显(p<0.01)。5:与模型组相比,填髓益脑方组、补阳还五汤组、尼莫地平组大鼠缺血侧脑组织凋亡神经细胞数目显著减少(P<0.01),三组间凋亡细胞数目无显著性差异(P>0.05)。结论:通过本实验发现显示滋阴填髓益脑方能够有效地减少缺血再灌注后的脑梗死面积,改善梗死区脑组织修复,滋阴填髓益脑方可提高模型动物血清SOD、Cu-Zn-SOD活性,表明滋阴填髓益脑方对脑组织细胞脂质过氧化损伤有显著保护作用,滋阴填髓益脑方可明显促进缺血皮质神经细胞Bcl-2的表达,同时也有抑制Bax表达的作用,即对Bax/Bcl-2有调低作用,因此可以推测滋阴填髓益脑法可以抑制神经细胞凋亡从而起到神经保护作用,而这种抗凋亡作用有可能是通过调低Bax/Bcl-2来实现的。
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