论文部分内容阅读
芽孢杆菌(Bacillus spp.)是土壤和植物微生态的优势微生物种群之一,具有很强的抗逆能力和抑菌防病增产作用,且其中的许多菌株能够产生植酸酶。目前已发现,在磷限量条件下施加微生物来源的植酸酶能够促进植物生长,但关于土壤生防微生物胞外植酸酶对植物耐盐性的影响尚未见报道。本文从作物根际土壤及本实验室已有的生防细菌中筛选出高产植酸酶且对小麦纹枯病菌及其它多种植物病原真菌具有拮抗作用的生防芽孢杆菌,并对其产生的胞外植酸酶在增强植物耐盐性中的作用进行了研究,具体结果如下:1.通过盆栽试验研究了在土壤中直接施用高产植酸酶的广谱拮抗生防芽孢杆菌(Bacillus subtilis)T2对作物耐盐性的影响。盆栽试验结果显示:无盐胁迫及180 mmol·L-1、360 mmol·L-1、540 mmol·L-1 NaCl胁迫条件下,土壤施加产胞外植酸酶芽孢杆菌菌悬液可促进小麦幼苗的生长,小麦株高、鲜重、可溶性糖含量、脯氨酸含量、过氧化物酶(POD)活性和过氧化氢酶(CAT)活性均得以不同程度的增高;无盐胁迫及180 mmol·L-1 NaCl胁迫条件下小麦叶片叶绿素含量增高;180 mmol·L-1、360 mmol·L-1、540 mmol·L-1 NaCl胁迫下植株超氧化物歧化酶(SOD)活性升高,MDA含量降低。表明土壤中施加具有胞外植酸酶活力的生防芽孢杆菌可增强作物对一定浓度范围内盐胁迫的耐受能力。2.为进一步明确芽孢杆菌胞外植酸酶在其增强作物耐盐性过程中的作用和地位,本研究进行了胞外植酸酶突变菌株的诱变选育。以T2为出发菌株,经微波(Microwave)和硫酸二乙酯(DES)诱变,得到遗传特性稳定的植酸酶正负突变株。酶活力测定结果显示:与出发菌株相比,培养72 h的正突变株M15胞外植酸酶活力提高31.7%,负突变株M3植酸酶活力降低93.3%。3.利用水培试验研究了出发菌株与负突变株对作物耐盐性的不同影响。采用有效磷限量、含NaCl 150 mmol L-1的植物生长水培液对小麦进行盐胁迫,在植酸存在的条件下,水培液中施加T2发酵液或植酸酶均可促进盐胁迫下小麦幼苗的生长,小麦株高、鲜重、叶片叶绿素含量和根系活力分别提高7.7%、2.5%,39.4%、19.3%,12.2%、2.1%和178.3%、173.9%。而植株丙二醛(MDA)含量分别降低85.1%和70.2%。失去植酸酶活力的负突变株M3发酵液则不具有提高小麦株高鲜重和叶绿素含量的作用,对根系活力的提高和对MDA含量的降低程度也均低于T2发酵液处理。上述结果表明生防芽孢杆菌胞外植酸酶活力在其增强小麦耐盐性过程中起了重要作用。4.将突变株在平板上连续传10代,考察其遗传稳定性。结果显示:突变株产酶能力无明显变化,表明获得的突变株具有良好的遗传稳定性。这对于该菌株在各种生态环境中长期稳定地发挥作用具有重要意义,并为将来高效菌肥的进一步开发奠定了基础。