论文部分内容阅读
第一部分食管鳞状细胞癌患者血清UHRF1表达水平及意义目的:检测食管鳞状细胞癌患者血清UHRF1水平,探究其对食管鳞状细胞癌术前诊断的价值以及与临床病理参数的关系,并分析血清UHRF1在围手术期食管鳞状细胞癌患者手术前后的变化,探究其判断手术效果和动态监测的价值。方法:收集130例ESCC患者术前血清,另收集其中62例患者术后(包括37例术后1周和25例术后2周)血清以及14例患者术后1周和2周血清,以67例体检健康者作为对照组。同时收集患者临床病理资料。用ELISA法检测血清UHRF1含量。采用受试者工作特征曲线(ROC曲线)评价其对食管鳞状细胞癌的诊断效能,并与传统肿瘤标志物作比较。采用独立样本t检验、配对t检验和单因素方差分析比较不同组间血清UHRF1的差异,采用Pearson相关和Spearman等级相关进一步分析其与临床病理参数的关系。结果:130例食管鳞状细胞癌患者血清UHRF1水平明显高于67例健康对照组,分别为(298.01±138.46)ng/L 和(165.12 ±40.83)ng/L,差异具有统计学意义(t=7.680,P<0.0001)。62例患者术后较之术前血清UHRF1水平显著降低(t=5.530,P<0.01),且与健康对照组无统计学差异(t=1.622,P>0.05);14例患者连续检测术前、术后1周、术后2周血清UHRF1水平逐渐降低,差异有统计学意义(F=7.595,P<0.01)。血清UHRF1区分健康人用于食管鳞状细胞癌诊断的ROC曲线下面积为 0.835(95%CI:0.781～0.890),当 cut off=199.36ng/L 时,最大约登指数为64.26%,灵敏度和特异度分别为77.69%和86.57%。诊断效能优于传统肿瘤标志物CEA、CA72-4、CA-199和CA-125。血清UHRF1水平与年龄、性别、肿瘤部位、大体分型无关,与肿瘤大小、浸润深度、淋巴转移程度、pTNM分期呈正相关,与肿瘤分化程度呈负相关。结论:血清UHRF1可作为食管鳞状细胞癌辅助诊断和围手术期动态监测的潜在标志物。第二部分 敲减UHRF1对食管鳞状细胞癌细胞增殖和迁移的影响目的:检测UHRF1在人食管鳞状细胞癌细胞ECA-109和KYSE-450的表达,探究其敲减后对细胞增殖和迁移的影响。方法:以人食管癌细胞株ECA-109和KYSE-450为研究对象,通过转染siRNA敲减UHRF1基因的在细胞中的表达,分析其增值、迁移能力变化,从而研究UHRF1在食管鳞状细胞癌细胞中的功能。用实时荧光定量PCR(qPCR)验证siRNA干扰的敲减效果。CCK-8实验检测UHRF1敲减对食管鳞状细胞癌细胞增殖能力的影响。Transwell小室实验检测细胞迁移能力。结果:ECA-109和KYSE-450转染siRNA后,UHRF1表达水平显著降低,与阴性对照组和空白组有统计学差异(P<0.05);UHRF1敲减组细胞的增殖能力降低(P<0.05);UHRF1敲减组细胞的迁移侵袭能力减弱(P<0.0001)。结论:敲减食管癌细胞株ECA-109和KYSE-450中UHRF1的表达,细胞迁移和增殖能力降低。