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由水稻条纹病毒(Rice stripe disease,RSV)引起的水稻条纹叶枯病是温带和亚热带稻区最重要的水稻病害之一。该病毒病是由介体灰飞虱(Laodelphax striatellus(Fallén))以循徊增殖型方式在寄主间传播,还能经卵传播。灰飞虱取食感染RSV的水稻植株后,RSV经过消化道、血淋巴到达唾液腺,最后又随唾液的分泌传给健康植物,所以唾液腺在灰飞虱传毒的过程中可能起着重要的作用。但唾液腺哪些基因或蛋白对RSV的传播有影响尚未研究。 本研究利用Illumina HiSeqTM2000测序技术对带毒和不带毒灰飞虱唾液腺样品进行转录组测序,带毒和不带毒样品各获得51M高质量的reads。通过组装和去冗余后总共得到44292个Unigene,平均长度为约665bp。通过与已知的蛋白数据库(Nr、Swiss-Prot、KEGG和Trembl)进行比对,有16910个Unigene得到注释。带毒(virulence)和不带毒(na(i)ve)样品相比,上调差异表达基因1832个,下调1338个。对差异基因进行GO和KEGG的功能富集分析,发现参与到核酸代谢和糖代谢的基因明显上调,而参与到蛋白质代谢的基因明显下调。选择前9个差异表达的基因进行表达量验证,结果表明7个基因(G375、G18143、G2239、G40、G12464、G17914、G12338、G12399和G703)和转录组数据相符,检测这7个基因在灰飞虱的脑、唾液腺、消化道、精巢和卵巢的相对表达量,结果表明G40在唾液腺中显著高表达,G18143在卵巢中显著高表达,G2239在脑中显著高表达,其他基因在各组织表达丰度相似。 以转录组中得到的G12464序列为基础得到该基因的全长cDNA,其ORF区长度为546bp。利用酵母双杂交系统研究了RSV编码的5个蛋白NS2、NS3、CP、SP、NSvc4和G12464互作关系,实验结果表明RSV编码的五个蛋白和G12464没有直接的互作关系。为了进一步研究G12464在传播RSV过程中的作用,我们用RNAi技术对G12464的表达进行干扰,结果表明G12464表达量下降了72%,对RSV的影响是RdRp和NS3表达量显著上升,SP和NSvc4表达量显著下降,而CP表达量仅有上升趋势。说明G12464可能会抑制RSV在灰飞虱体内的增值。 综上所述,本研究不仅揭示了灰飞虱唾液腺转录组特性,而且为揭示灰飞虱与RSV的互作机制提供了重要的线索。