【目的】制备抗乙型脑炎病毒非结构蛋白NS1多克隆抗体和单克隆抗体,建立快速检测乙型脑炎病毒滴度的FFA方法,验证该法替代病毒蚀斑法测定乙型脑炎减毒活疫苗滴度的可行性并将该法作初步应用。另外,利用制备得到的抗体,建立针对乙型脑炎病毒的抗原定量检测方法,用于疫苗生产中抗原鉴别及质量控制。【方法】利用原核表达方式构建乙型脑炎病毒原核重组质粒p ET-30a-NS1,构建乙型脑炎病毒非结构蛋白NS1原核表达体系;以制备、纯化、鉴定后的NS1重组蛋白免疫动物,制备抗乙型脑炎病毒NS1蛋白单克隆抗体和多克隆抗体;利用所得多克隆抗体,建立快速检测乙型脑炎病毒滴度的FFA方法,将该法与病毒蚀斑法作比对分析,并对该方法就专属性、准确度、精密度、线性、范围和耐用性方面进行验证;用经验证后的荧光灶法检测28批乙脑减毒活疫苗,分析其应用于生产的可行性;对所得抗体进行HRP标记,以方阵滴定法确定最佳抗原包被浓度和检测抗体浓度,建立针对乙型脑炎病毒的抗原ELISA检测方法,确定该方法线性范围并对其专属性、准确性、精密度和耐用性进行验证。【结果】制备了高效价的抗乙型脑炎病毒多克隆抗体和单克隆抗体,两种抗体均可与乙型脑炎病毒发生特异性反应,与其他病毒（森林脑炎病毒、黄热病毒、柯萨奇病毒A2型和A4型）无交叉反应;以抗乙型脑炎病毒多克隆抗体建立了快速检测乙型脑炎病毒滴度的FFA方法,FFA方法学验证结果均符合乙脑减毒活疫苗的质控要求,且与乙型脑炎病毒的现用滴度检测方法——蚀斑法相比,FFA检测结果更趋一致;以两种抗体建立了ELISA抗原检测方法,经验证该法只识别JEV-NS1抗原,与其他抗原无交叉反应,且各项验证结果均符合《中国药典》规定。【结论】建立的FFA方法和抗原ELISA检测方法均通过方法学验证,可分别用于乙型脑炎减毒活疫苗成品的滴度测定和毒种、成品的鉴别试验,对乙型脑炎减毒活疫苗的生产具有一定的指导意义。