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背景:重症肌无力(myasthenia gravis,MG)是一种自身免疫疾病,研究表明,其发生机制主要是机体产生针对神经肌肉接头(neuromuscular junctions,NMJs)相关蛋白的自身抗体。自身抗体针对的蛋白主要包括抗乙酰胆碱受体(acetylcholine receptor,AChR)、肌肉特异性激酶(muscle-specific kinase,MuSK)、脂蛋白相关蛋白4(lipoprotein receptor-related protein 4,Lrp4)以及集聚蛋白(agrin)等。其中抗AChR型重症肌无力患者最为常见,约占总患者的80%,其次是抗MuSK型MG(MuSK-MG)。MuSK-MG发病机制主要是由于自身抗体与肌细胞上MuSK结合并阻碍其信号传递功能,抑制AChR聚集,导致神经肌肉接头终板电位减弱。目前临床上的对症治疗对大多数抗AChR型重症肌无力患者有较好的疗效,但对MuSK-MG患者疗效甚微。因此MuSK-MG也被称为难治性重症肌无力,成为临床上治疗的难题。腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV),作为目前广泛利用的基因治疗工具,能安全有效地运用于动物体。我们在本课题中检验了MuSK-MG患者血清中自身抗体的主要结合位点,并探索利用重组AAV在实验性MuSK自身免疫性重症肌无力(experimental autoimmune myasthenia gravis,EAMG)小鼠模型中进行抗原特异性治疗的可行性。目的:鉴定MuSK-MG患者抗体主要结合位点,构建MuSK-EAMG小鼠模型,探索利用重组AAV进行干预治疗的可行性。方法:构建MuSK胞外段重组载体并体外表达纯化MuSK胞外段蛋白,利用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测自身抗体的主要结合位点,免疫小鼠构建MuSK-EAMG模型,并检验小鼠抗MuSK抗体滴度和行为学表现,运用重组AAV探索对MuSK-EAMG的治疗可行性。结果:(1)表达并纯化MuSK胞外段蛋白;(2)利用ELISA技术,在85例MG患者中,鉴定出22例抗MuSK抗体阳性,并发现这些患者中的自身抗体主要针对MuSK胞外段的Ig1结构域;(3)使用纯化的MuSK胞外段蛋白免疫小鼠,获得MuSK-EAMG小鼠模型;(4)rAAV9型病毒可以高效感染小鼠骨骼肌。结论:我们鉴定发现约26%的MG患者血清中带有抗MuSK抗体,抗体的主要结合位点为MuSK蛋白的Ig 1结构域;利用AAV过表达Ig 1结构域或对应的多肽片段,可能特异性阻断自身抗体与内源蛋白的结合,从而对MuSK-MG进行抗原特异性的治疗。