5种蝗虫肠道微生物多样性分析及纤维素分解菌的分离鉴定

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蝗虫是昆虫纲Insecta、直翅目Orthoptera、蝗总科Acridoidea昆虫的统称,是一类重要的农牧业害虫。因其分布广泛、食量大、食性广、繁殖能力强、迁移速度快,成群的蝗虫可对农牧业产生巨大危害。蝗虫肠道中栖息着大量的微生物,这些微生物与宿主相互作用,相互影响,形成一种协同进化的关系,在此过程当中,微生物与微生物之间也形成了多种多样的种群结构以及生物学功能。研究蝗虫对纤维素的消化及肠道微生物的多样性和功能,可为农作物秸秆的绿色利用提供新思路。本研究主要从以下3个方面开展工作:1.采用双末端测序方法,通过测序平台Illumina HiSeq构建小片段基因文库,测定中华剑角蝗(Acrida cinerea Thunberg,1815)、疣蝗(Trilophidia annulata Thunberg,1815)、短额负蝗(Atractomorpha sinensis Bolivar,1905)、蒙古束颈蝗(Sphingonotus mongolicus Saussure,1888)、短星翅蝗(Calliptamus abbreviatus Ikonnikov,1913)等5种蝗虫肠道中细菌的16S r DNA序列进而分析微生物多样性。结果表明:5种蝗虫的14个样品,其肠道菌群共注释到7门12纲21目43科57属;在门级水平,变形菌门Proteobacteria所占比例最高,厚壁菌门Firmicutes次之,在属级水平,5种蝗虫的肠道菌群中克雷伯氏菌属Klebsiella所占比例最高;Alpha多样性分析表明5种蝗虫肠道微生物物种丰度从高到低依次是中华剑角蝗、蒙古束颈蝗、疣蝗、短额负蝗、短星翅蝗,5种蝗虫的肠道微生物物种多样性由大到小依次是蒙古束颈蝗、疣蝗、中华剑角蝗、短星翅蝗、短额负蝗;在Beta多样性分析中PCo A分析和UPGMA聚类分析发现同一种蝗虫的各个样品没有全部聚到一支,除了个体间差异之外,采集时间的不同也是原因之一;组间样品LEf Se差异性分析仅在2种蝗虫肠道内筛选到的4个Biomaker,其中短额负蝗肠道中的Biomaker有Rickettsiales,Anaolasmataccae和Wolbachia,蒙古束颈蝗肠道中筛选出来的Biomaker是Pantoea;KEGG功能预测结果显示各蝗虫肠道中菌群参与碳水化合物代谢的功能基因占比最大。2.利用蒽酮比色法和苔黑酚比色法分别测定了5种蝗虫的纤维素消化率和半纤维素消化率,结果表明:5种蝗虫的纤维素消化率比半纤维素的消化率要高,纤维素消化率由高到低依次是蒙古束颈蝗(67.91%)、短星翅蝗(60.23%)、中华剑角蝗(56.97%)、短额负蝗(54.86%)、疣蝗(49.87%);半纤维素消化率由高到低依次是蒙古束颈蝗(47.51%)、中华剑角蝗(39.28%)、短星翅蝗(32.18%)、疣蝗(19.25%)、短额负蝗(17.77%)。3.采用传统培养法和生理生化、16S rRNA基因测序鉴定法,从疣蝗、短额负蝗、短星翅蝗和蒙古束颈蝗4种蝗虫肠道中分离、鉴定到11株纤维素分解菌,其中疣蝗肠道中分离到4株菌,均鉴定为芽孢杆菌属Bacillus;短额负蝗肠道中分离到5株菌,其中1株鉴定为芽孢杆菌属,其余4株菌鉴定为气单胞菌属Aeromonas;短星翅蝗肠道中分离到1株菌,鉴定为克雷伯氏菌属Klebsiella;蒙古束颈蝗肠道中分离到1株菌,鉴定为克雷伯氏菌属。经过纤维素酶活及滤纸酶活的测定发现芽孢杆菌的纤维素酶活力大于另外两个菌属,滤纸酶活力相差不大。
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