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目的：CD147,又名基质金属蛋白酶诱导因子,属于免疫球蛋白超家族的细胞膜表面高糖基化蛋白,在许多恶性肿瘤中表达增高,能促进肿瘤的存活、生长、侵袭与转移。CD147高表达还能提高肿瘤细胞对化疗药物的耐药性。相关研究报道,CD147在喉癌细胞株Hep2中高表达,因此利用本实验室前期构建的CD147ShRNA真核表达载体,利用RNAi技术高效特异地沉默喉癌细胞株Hep2中CD147的表达,以分析其在喉癌侵袭、转移及其对顺铂敏感性的作用机制。研究方法：1)将前期构建的重组质粒pSilencer/shRNA-control、pSilencer/shRNA1、pSilencer/shRNA2稳定转染至Hep2细胞中,采用RT-PCR法和Western法分别检测转染细胞中CD147mRNA和蛋白表达的变化；2)采用MTT法检测转染pSilencer/shRNA-control、pSilencer/shRNA1、pSilencer/shRNA2后Hep2细胞增殖水平的变化及其对化疗药物顺铂的敏感性；3)采用Transwell法检测CD147shRNA对Hep2细胞的体外侵袭能力的影响；4)采用明胶酶谱法检测转染pSilencer/shRNA-control、pSilencer/shRNAl、pSilencer/shRNA2后Hep2细胞培养液中MMP-2和MMP-9的活力；5)采用裸鼠皮下异种移植模型观察CD147shRNA对Hep2细胞在体内侵袭和转移能力的影响。结果：1)所构建载体经阳离子脂质体介导转染人喉癌细胞株Hep2,G418筛选后有限稀释法成功获得阳性克隆株,RT-PCR法和western法显示两组ShRNA均高效而特异地沉默了喉癌细胞Hep2中CD147的表达。2)MTT结果显示,在转染72h、96h、120h后,Hep2/shRNA1和Hep2/shRNA2组细胞增殖能力分别下降到了77.34%(P<0.01)和70.43%(P<0.01),62.99%(P<0.01)和73.76%(P<0.01),67.49%(P<0.01)和61.37%(P<0.01)。Hep2/shRNA1和Hep2/shRNA2组细胞对顺铂敏感性也明显增高。3)细胞体外侵袭力测定结果显示：Hep2/shRNA1和Hep2/shRNA2组细胞的穿膜细胞数低于Hep2和Hep2/shRNA-control组。4)明胶酶谱结果显示：Hep2/shRNA1和Hep2/shRNA2组的MMP-2和MMP-9明胶酶活性显著降低。5) Hep2/shRNAl和Hep2/shRNA2组细胞在裸鼠皮下的成瘤体积较Hep2组分别降低’至38.35%和36.08%。结论：1)RNAi技术特异性沉默Hep2细胞CD147表达后,细胞增殖能力受到明显抑制,说明CD147能促进喉癌细胞的生长。2)RNAi技术特异性沉默Hep2细胞CD147表达后,细胞对化疗药物顺铂的敏感性也明显增强,说明CD147可以作为化疗药物的一个靶分子。3)Hep2细胞的CD147基因经RNAi技术特异性沉默后,细胞体外侵袭能力和体内成瘤能力明显降低,说明CD147与喉癌的进展相关,可能为一种新的喉癌治疗靶分子。