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藏药独一味Lamiophlomis rotata（Benth.）Kudo为唇形科独一味属（genusLamiophlomis）植物,该属一属仅一种,曾隶属与糙苏属（genus Phlomis）,藏语称“大巴”、“打布巴”,生长于海拔3000m以上的碎石滩中,分布在甘肃南部、青海东南部、四川西北部、云南西北及西藏大部。其根及全草入药,是我国藏、蒙、纳西等民族民间常用药之一。《四川中药志》及《云南植物志》均记载其治疗刀枪伤有奇效。1982年起,兰州医学院的梁重栋教授开展了藏药独一味的基础与临床研究,至1992年研制了以其水提取物为主要组成的国家新药独一味片。中国药典1995年版起相继收载独一味片、独一味胶囊及独一味药材。独一味及其制剂具有活血止痛、化瘀止血之功效,临床广泛用于各种手术后的止血镇痛及妇科、口腔科出血性疾病的治疗。独一味主要含以8-O-乙酰基山栀子苷甲酯为主的环烯醚萜苷及以木犀草素-7-O-葡萄糖苷为代表的黄酮类成分,中国药典规定独一味及其制剂需测定总黄酮及木犀草素含量,但是独一味镇痛止血有效成分至今未能明确阐述。有些报道认为黄酮、环烯醚萜苷以及其中的苯乙醇苷均可能是其镇痛有效成分,而止血有效成分至今未见研究。近年来独一味的临床应用及其二次开发十分火热,有效成分的不明确极大的阻碍了新制剂的研制,也使得其质量标准的制定缺乏依据,为了解决上述不足,提高独一味及其制剂的质量标准,促进新制剂和新工艺的开发,我们在这篇学位论文中进行了以下一些创新性的研究（1）深入研究独一味止血活性部位的化学成分,分离鉴定了5个主要的环烯醚萜苷类化合物,同时运用单晶衍射技术阐明其中一个新化合物的绝对构型,首次运用液质联用（HPLC-MS）技术快速分析独一味及其制剂中的环烯醚萜苷类成分。首次建立一阶导数分光光度法快速测定独一味中止血活性部位总环烯醚萜苷的含量,对中国药典中独一味含量测定项作了有效弥补。（2）创造性地采用大孔吸附树脂结合聚酰胺柱色谱法成功实现独一味中总黄酮、总环烯醚萜苷及大极性部分（主要以糖类成分为主）的富集分离,相关工艺流程获得国家发明专利,为藏药独一味的研究及二次开发打下了良好基础。（3）深入研究独一味水提取物及其中的总黄酮、总环烯醚萜苷及大极性部分的止血作用。明确了独一味水提取物及总环烯醚萜苷具有良好的止血作用,总环烯醚萜苷是其止血活性部位,总黄酮及大极性部分未见明显的止血作用。（4）初步阐明了独一味具有促进肝脏合成功能,提高动物血液中凝血酶水平及纤维蛋白原含量,从而发挥良好止血作用的机理。初步明确了独一味总环烯醚萜苷的安全性。论文共分四个部分。第一章藏药独一味研究概况及糙苏属植物化学成分研究进展（1）藏药独一味的研究进展:检索大量文献资料,从本草史载及考证,植物分类,药材形态及资源,化学成分,药理活性,临床应用,制剂研究开发,质量标准等八个方面对藏药独一味进行较为全面的综述,并总结出问题与不足。（2）糙苏属植物研究概况:对与独一味原属糙苏属进行文献综述,详细归纳了从全球60多个该属植物中分类鉴定出的150多个化合物,以及镇痛、抗炎、抗氧化等10个方面的药理活性,为独一味新制剂的深层次开发及代用资源的寻找提供思路。第二章独一味及其总环烯醚萜苷的止血作用和机理的研究以止凝血基础理论为指导,采用小鼠断尾出血时间（BT）,毛细管凝血时间（CT）,测定大鼠血液凝集参数（PT,APTT,TT,FIB）及肝功能和血脂参数。在肯定前人关于独一味水提取物具有止血作用的基础上,首次证明独一味水提取物能显著缩短大鼠凝血酶时间（TT）,增加纤维蛋白原时间（Fib）,具有良好的明显的量效和时效关系。首次比较了独一味中总黄酮、总环烯醚萜苷以及以糖类成分为主的大极性部分的止凝血作用,证明其中总环烯醚萜苷为其止凝血活性部位,具有良好的量效和时效关系,总黄酮及大极性部分未见明显止血作用。首次证明独一味水提取物及总环烯醚萜苷能一定程度地促进肝脏合成功能而不会增加胆固醇、甘油三酯等血脂参数水平,其止凝血作用可能与肝脏有关而与血脂等无关。实验还对独一味水提取物及总环烯醚萜苷的急性毒性进行了初步探讨。第三章独一味止血活性部位化学成分研究（1）采用大孔树脂结合聚酰胺色谱柱分离提取独一味各活性部位:根据独一味中各类成分理化性质的不同,创造性地采用大孔吸附树脂结合聚酰胺柱色谱法成功地实现了独一味各类成分的富集分离,总黄酮部分得率为10.25%,其中的黄酮含量达64.97%;总环烯醚萜苷部分得率为19.77%,其中的环烯醚萜苷含量达66.92%;以糖类成分为主的大极性部分得率为44.30%。为药理活性筛选提供了合格的材料。（2）环烯醚萜苷单体的分离与鉴定:利用硅胶柱层析及聚酰胺柱层析技术结合天然有机化学波谱技术,从独一味止血活性部位总环烯醚萜苷中分离并鉴定了5个含量较高的环烯醚萜苷单体成分,分别鉴定为8-O-乙酰氧基山栀子苷甲酯（Ⅰ）、番木鳖苷（Ⅱ）、山栀子苷甲酯（Ⅲ）、phloyosideⅡ（Ⅳ）和8-去羟基-山栀子苷（Ⅴ）。其中化合物Ⅴ为新化合物。采用X—单晶衍射技术结合MS、1H NMR、13C NMR、HMQC、HMBC、NOE等确定该化合物C-1、C-5、C-6、C-8和C-9的绝对构型分别为（S）,（S）,（R）,（R）和（R）。葡萄糖为椅式构型,C-1’到C-5’5个手性碳原子分别为（R）,（R）,（S）,（R）,和（R）构像。（3）独一味环烯醚萜苷类成分的HPLC-PAD-APCI/MS定量定性分析:首次运用HPLC-PAD-APCI/MS技术分析独一味中环烯醚萜苷类成分,采用5个标准化合物比对的方法,提出醋酸流动相下的HPLC-APCI-MS中环烯醚萜苷的质谱行为规律:C-4位羧基甲酯化的环烯醚萜苷一定出现[M-H]-,[M-H+33]-,和[M-H+60]-离子峰组合,相反C-4位羧基未甲酯化的环烯醚萜苷则只会出现[M-H]-准分子离子峰。利用这种规律推定了独一味中另外4个环烯醚萜苷的基本结构。同时建立了独一味中几个重要环烯醚萜苷即8-O-acetylshanzhiside methylester,loganin,8-dehydroxy shanzhiside,phloyosideⅡ,和shanzhiside methylester的HPLC定量分析方法。第四章总环烯醚萜苷的含量测定及制备工艺研究（1）首次建立聚酰胺色谱柱结合一阶导数分光光度法测定独一味及其制剂中总环烯醚萜苷含量。以8—乙酰氧基山栀子苷甲酯为标准品,选择聚酰胺色谱柱预先除去其中黄酮类成分,测定波长为250 nm,为独一味质量标准的修订作了有益尝试。（2）首次建立大孔树脂吸附法富集纯化独一味止血活性部位总环烯醚萜苷的工艺。实验比较了7种不同厂家,不同型号的大孔树脂对环烯醚萜苷类成分的吸附与解吸附能力。发现XDA-1对独一味水提取物中总环烯醚萜苷类成分有较好的吸附能力,其静态吸附比可达到16.95 mg/ml。树脂,动态吸附比达到15.18 mg/ml,树脂。同时考察了洗脱体系、洗脱曲线及树脂的再利用等各项工艺参数。洗脱物中总环烯醚萜苷纯度可达到67.53%,洗脱回收率达到90.06%,大孔吸附树脂重复使用8次,尚能获得良好结果。