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背景: 全世界每年有160万确诊为肺癌,占新确诊癌症人数的13%,140万患者死于肺癌,占癌症相关死亡人数的18%。在中国肺癌的死亡率和发生率均为全世界最高。在肺癌的众多分型当中,非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer,NSCLC)占80%-85%,其中肺腺癌占50%以上。尽管对于肺腺癌的治疗已取得了很大进展,但患者的预后依然很差,5年生存期只有15%。 大量的研究表明间质细胞的组成与肿瘤的预后相关,如肿瘤中浸润的特异性淋巴细胞,巨噬细胞,自然杀伤细胞,浆细胞等与肿瘤患者的生存期相关,也与临床病理相关。在肿瘤间质当中含有大量成纤维细胞,这些成纤维细胞不同于处于活化表型中的正常成纤维细胞,尽管其来源和功能存在很大的不同,这些成纤维细胞统称为肿瘤相关成纤维细胞(cancer associated fibroblasts,CAFs),其以α平滑肌动蛋白,成纤维细胞活化蛋白,血小板衍生生长因子受体α/β。然而这些标志物通常在肿瘤中浸润的成纤维细胞或其片段上表达,并非CAF特异性。 大量研究发现CAFs并不仅仅构成肿瘤,它还可分泌一系列的细胞因子来影响肿瘤细胞的增殖、迁移及浸润的免疫细胞的数量和功能,从而促进肿瘤的发生发展。有报道证实CAFs与黑色素瘤、食管癌等多种肿瘤患者的临床病理特征及预后密切相关,然而CAFs与肺癌尤其是肺腺癌患者临床病理特征及肿瘤浸润免疫细胞的相关性仍然鲜有报道。 内容: (1)CAFs特异标志物的确定 通过流式分选和体外诱导CAFs,采用Real-time PCR检测了CAFs和NFs中α-SMA及PDGFR-α的表达情况,并通过免疫荧光及免疫组化进一步验证了LLC移植瘤及人肺腺癌中CAFs表达α-SMA的情况,为确定CAFs的特异性标志物提供更确切的依据,进而为后续研究奠定基础。 (2)CAFs的分布与肺腺癌患者临床病理特征的相关性 收集56例新桥医院手术切除的肺腺癌肿瘤标本,并通过查询病历搜集和整理患者的各项临床病理特征资料。采用α-SMA为标记物,采用免疫组化的方法检测了肿瘤标本中α-SMA表达情况,并进一步分析了CAFs在间质细胞的比例与患者临床病理学特征的相关性。 (3)CAFs与肺腺癌患者肿瘤中浸润的免疫细胞的相关性 通过体外诱导的方法获得CAFs,采用Real-time PCR检测了CAFs细胞中免疫抑制细胞因子的表达;采用免疫组化的方法检测了肿瘤浸润免疫细胞的分布情况,并进一步分析了CAFs比例与肿瘤浸润免疫细胞数量的相关性。 成果: 1)与NFs相比,CAFs表达更高的α-SMA;肿瘤中α-SMA主要表达于CAFs;α-SMA可作为CAFs的主要标记物。 2)CAFs比例与肺腺癌患者年龄、性别及肿瘤胸膜侵犯无明显相关性;CAFs与肺腺癌患者吸烟情况、肿瘤大小、淋巴结转移、肿瘤分化程度及肿瘤分期密切相关,进一步说明CAFs可促进肺腺癌生长及侵袭转移。 3)与NFs相比,CAFs中IL-6,IL-8,IL-10及TGF-β等免疫抑制因子表达显著增加;肺腺癌患者肿瘤标本中CAFs比例与肿瘤浸润的CD8+T细胞,CD4+T细胞,Foxp3+Treg和CD33+MDSCs等免疫细胞数量无明显相关性。 本研究确定了α-SMA作为CAFs的主要标记物,并从临床标本的角度进一步证实了CAFs促进肺腺癌发生发展的作用,为肺腺癌治疗提供了新的治疗靶点。