论文部分内容阅读
目的：探讨海生素对白血病细胞K562及其耐药细胞K562/ADM体外增殖的抑制作用,对K562及K562/ADM细胞凋亡和K562细胞周期的影响,对K562/ADM细胞耐药相关mdrl和Sorcin基因及其蛋白表达的影响。方法：采用MTT法测定海生素对K562及K562/ADM细胞的体外抑制作用,免疫细胞化学法检测凋亡相关蛋白bcl-2、bax的表达,流式细胞仪测定细胞早期凋亡率、细胞周期和Pgp蛋白表达,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测mdrl和Sorcin基因表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)及Western blot检测Sorcin蛋白表达。结果：1、海生素在低浓度0.1、1μg.ml-1时对K562细胞无生长抑制现象,细胞存活率分别为96.23%、86.12%,而浓度为10μg.ml-1时细胞存活率为68.46%,细胞数明显减少,在此浓度下随时间的延长细胞存活率有下降趋势。较大浓度100μg.ml-1时细胞大部分死亡2、海生素在低浓度0.1、1、10μg.ml-1时对K562/ADM细胞无生长抑制现象,海生素在浓度为40μg.ml-1时,可有明显的细胞生长抑制现象,且随时间的延长生长抑制越明显,具有时效关系。3、流式细胞仪检测发现海生素在浓度10μg.ml-1时可阻止K562细胞周期于G1/S期。4、海生素在20μg.ml-1浓度时,作用K562细胞12小时,流式细胞仪检测早期细胞凋亡率为(10.53±2.45)%与对照组(2.46±1.28)%比较p<0.05,在36小时早期细胞凋亡率为(35.45±3.21)%；、随浓度的增加和时间的延长细胞凋亡明显,可出现细胞死亡。5、海生素在浓度为40μg.ml-1时作用K562/ADM细胞可检测到细胞凋亡亚G1峰,海生素(40μg.ml-1)作用0、12、24、36、48、72小时,测定细胞早期凋亡率,细胞凋亡率随时间的延长,在12、24小时凋亡率增加,而在36、48、72小时后细胞凋亡率增加不明显。6、海生素在浓度为20μg.ml-1和40μg.ml-1时bcl-2蛋白表达率为(58.78±4.65)%、(26.57±2.13)%。未经海生素处理的K562细胞bcl-2呈强阳性表达(90.98±8.66)%。对照组K562细胞bax阴性表达,海生素(10μg.ml-1)处理K562细胞后bax阳性表达,海生素(20μg.ml-1)处理K562细胞后bax强阳性表达。7、对照组耐药细胞bcl-2强阳性表达(0.09±0.01)；海生素(20μg.ml-1)处理K562耐药细胞24h、48h,检测分析bcl-2阳性表达灰度值分别为0.05±0.02、0.05±0.01,和对照组比较P<0.05,实验组bcl-2阳性表达率与药物浓度和作用时间有负相关性；对照组耐药细胞bax阴性表达,海生素(20μg.ml-1)处理K562耐药细胞后bax弱阳性表达,海生素(40μg.ml-1)处理K562耐药细胞后bax强阳性,实验组bax阳性表达率与药物浓度和作用时间有正相关性。海生素在一定浓度下对K562及其耐药细胞可上调bax蛋白表达而对bcl-2蛋白下调其表达。8、通过PCR检测不同浓度药物对耐药细胞mdrl表达无影响。9、PCR检测也同样发现不同浓度药物对耐药细胞Sorcin表达基因的无影响；应用Western blot检测K562/ADM细胞Sorcin蛋白的表达。经图像分析K562/ADM细胞组Sorcin蛋白的表达与对照组无差异(P>0.05)。结论：1、海生素可抑制K562和K562/ADM细胞生长；2、海生素可影响bcl-2和bax蛋白表达使K562细胞生长周期停滞于G1/S期；3、海生素可通过下调bcl-2蛋白表达、上调细胞bax蛋白表达,诱导细胞凋亡；4、海生素可通过调节bcl-2及bax蛋白的表达影响细胞耐药；5、海生素对耐药细胞mdrl基因的表达无影响,可下调耐药细胞Pgp蛋白表达；6、海生素对Sorcin基因及其蛋白表达无影响。