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目的:1、探讨IL-7/IL-7R信号通路在人类母胎界面着床期的变化,了解IL-7/IL-7R信号通路是否参与胚胎着床及妊娠维持因素之一。2、探讨调节动物模型IL-7/IL-7R信号通路后孕鼠体内生殖免疫状态,了解阻断IL-7/IL-7R信号是否通过抑制Thl7细胞相关炎性因子分泌,降低其炎性作用,增加Treg细胞功能,诱导母胎免疫耐受,从而抑制流产发生。方法:1、通过免疫组织化学方法,了解在人类妊娠早期IL-7/IL-7R言号通路是否参与胚胎着床及妊娠维持的因素之一。2、动物分为六组:正常孕鼠组、正常孕鼠+IL-7组、正常孕鼠+IL-7Ra组、流产小鼠组、流产小鼠+IL-7组及流产小鼠+IL-7Ra组,分别统计每组小鼠胚胎吸收率;应用流式细胞法分析每组小鼠脾脏血中Th17/Treg细胞;运用荧光定量PCR法分析各组小鼠母胎界面中Foxp3及ROR γ t mRNA的表达,通过免疫组织化学法了解各组小鼠蜕膜中Foxp3及IL-17A的表达;调节动物模型IL-7/IL-7R信号通路后孕鼠体内生殖免疫状态,了解阻断IL-7/IL-7R信号是否通过抑制Th17细胞相关炎性因子分泌,降低其炎性作用,增加Treg细胞功能,诱导母胎免疫耐受,从而抑制流产发生。结果:1人母胎界面IL7/IL-7R表达通过免疫组化的方法发现,USRA患者蜕膜基质细胞中的IL-7呈强阳性或中等阳性表达较正常孕妇蜕膜弱阳性或者阴性表达明显增加,有统计学差异,USRA患者及正常孕妇蜕膜腺体中IL-7表达相似。而USRA患者蜕膜基质细胞中的IL-7R表达为阴性或弱阳性,较正常孕妇的弱阳性或者中等阳性表达明显降低,具有统计学差异,在蜕膜腺体中,两组孕妇的IL-7R表达类似。2动物实验结果2.1胚胎吸收率统计统计正常孕鼠对照组胚胎吸收率(embryo absorptivity,EA)为11.1%,当正常孕鼠尾静脉注入IL-7后EA为20.63%,后者与前者相比EA增高,经过统计学分析差异有意义;而当正常孕鼠注入IL-7Ra后EA略有增加为13.04%,与对照组差异显著;流产小鼠组EA为26.15%,IL-7干预后EA为31.67%,有增加,而当IL-7 Ra干预后EA为13.43%,呈明显下降趋势,经过统计学分析IL-7 Ra干预小组与流产对照组差异显著。由此发现, L-7可能诱导炎症反应促进局部胚胎吸收,导致流产发生,而阻断此信号通路降低胚胎吸收率,抑制流产的发生。2.2流式细胞法检测结果分析正常孕鼠对照组脾脏血中Th17(CD4+IL-17A+/CD4+)/Treg细胞(CD4+CD25high Foxp3+/CD4+)为(1.65±0.15%)/(4.90±0.25%),正常孕鼠+IL-7干预后外周血中Th17/Treg细胞为(4.35±0.22%)/(3.26±0.13%)、正常孕鼠+IL-7Ra组外周血中Th17/Treg细胞(1.95±0.09%)/(4.71±0.22%),经过统计学分析发现,加入IL-7干预的正常孕鼠体内炎症性Th17细胞明显增加,而相反Treg细胞明显降低,差异显著;正常孕鼠尾静脉注入IL-7Ra干预,统计发现Th17/Treg细胞与正常孕鼠对照组相似,无统计学差异。流产小鼠组脾脏血.中Th17/Treg细胞为(4.84±0.18%)/(2.57±0.13%),IL-7作用后流产小鼠组外周血中Th17/Treg细胞为(5.38±0.17%)/(1.93±0.09%),无明显差异;IL-7Ra作用后流产小鼠组外周血Th17/Treg细胞为(2.23±0.08%)/(4.93±0.16%),从我们结果发现,当IL-7Ra阻断IL-7信号通路,抑制Th17细胞分化及局部炎症因子分泌,诱导Treg细胞分化,增加其抑制功能抑制URSA的发生。2.3荧光定量PCR结果分析各组小鼠母胎界而中Foxp3 mRNA和ROR γ t mRNA表达。表达率计算方法2-△△CT方法,相对于正常孕鼠对照组Foxp3 mRNA和ROR γ t mRNA表达变化倍数,正常孕鼠+IL-7组Foxp3 mRNA的2-△△CT值为0.75±0.22,RORγt mRNA的2-△△CT值为1.79±0.55,与正常孕鼠对照组差异显著,流产率增加(P<0.05);正常孕鼠+IL-7Ra组Foxp3 mRNA的2-△△CT值为0.91±0.17,RORγt mRNA的2-△△CT值为1.11±0.12,与正常孕鼠对照组差异无统计学意义;流产小鼠对照组Foxp3 mRNA的2-△△CT值为0.53±0.15,RORγt mRNA的2-△△CT值为1.87±0.49,与正常孕鼠组的基因相比,差异有统计学意义;流产小鼠+IL-7组Foxp3 mRNA的2-△△CT值为0.39±0.12,ROR γt mRNA的2-△△CT值为4.87±0.69(P<0.05),与流产小鼠组相比,显著差异;流产小鼠+IL-7R组Foxp3 mRNA的2-△△CT值为0.92±0.12,ROR γ t mRNA的2-△△CT值为1.22±0.61,与流产小鼠对照组相比,差异显著,阻断IL-7的信号通路,Th17相关细胞因子分泌减少,降低其局部的炎症作用,抑制流产的发生(P<0.05)。2.4免疫组化的结果分析正常孕鼠蜕膜中IL-17A呈阴性或者弱阳性表达,Foxp3呈中等阳性或者强阳性表达;正常孕鼠+IL-7组IL-17A弱阳性或者中等阳性表达,Foxp3呈阴性或者中等阳性表达,与正常孕鼠蜕膜中的表达差异显著;正常孕鼠+IL-7Ra组IL-17A呈阴性或者弱阳性表达,Foxp3呈中等阳性或者强阳性表达,与正常孕鼠基因表达无统计学差异;流产小鼠组蜕膜IL-17A呈中等阳性或者强阳性表达,Foxp3呈阴性或者弱阳性表达,与正常孕鼠蜕膜中的基因表达差异显著;流产小鼠+IL-7组IL-17A基因呈中等阳性或者强阳性表达,Foxp3基因呈阴性或者中等阳性表达,与流产小鼠组表达无明显差异;流产小鼠+IL-7Ra组IL-17A基因呈阴性或者弱阳性表达,Foxp3基因呈中等阳性或者强阳性表达,与流产小鼠对照组基因表达差异显著。结论:在人类妊娠早期,IL-7/IL-7R信号通路可能是参与胚胎着床及妊娠维持的因素之一,URSA患者局部IL-7表达增强而IL-7R降低可能与妊娠胚胎丢失有关。正常孕鼠及流产小鼠组中加入IL-7后发现Th17细胞相关的细胞因子IL-17A比例增高、特异性转录因子ROPγt基因表达水平升高及蜕膜中基因IL-17A表达增加、EA增加,IL-7可诱导Th17细胞相关的细胞因子的分泌,促进局部炎症作用加重流产的发生;而当IL-7Rα阻断此信号通路,发现外周血中细胞因子IL-17A比例降低、ROR γt表达亦降低,蜕膜中IL-17A表达降低,EA降低。IL-7Rα阻断此信号通路,影响Th17细胞的存活和分化及相关细胞因子的分泌,抑制局部炎症作用;研究发现同时也促进Treg细胞的分化及相关细胞因子的分泌,诱导妊娠免疫耐受。推测IL-7Rα阻断信号通路通过抑制URSATh17细胞炎性作用,增加Treg细胞的分化,诱导母胎免疫耐受,降低流产的发生率。