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背景食管癌是常见的消化系统恶性肿瘤之一,根据WHO统计,我国食管癌病死人数每年约20万,占世界的一半。肿瘤的转移是食管癌患者预后不良和死亡的主要原因。RIOK3是非典型丝/苏氨酸蛋白激酶RIO激酶(Right Open Reading Frame Kinase)家族成员之一。RIO激酶在细胞信号传导和肿瘤的发生和转移中发挥重要作用。目前发现RIOK3与乳腺癌、胰腺导管腺癌的发生进展关系密切,而RIOK3在食管癌的发生发展中的作用尚不十分清楚。目的通过生物信息学技术、免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)、Western blot和实时定量聚合酶链式反应(Real-time quantitative PCR,qRT-PCR)等方法检测RIOK3在食管癌及癌旁组织和细胞中的表达,细胞功能实验检测RIOK3对食管癌细胞增殖和迁移能力的影响,并通过Western blot方法检测RIOK3与EMT相关蛋白之间的关系。方法1.利用Oncomine和GEO(Gene Expression Omnibus)数据库,分析食管癌中RIOK3的表达情况。2.运用IHC方法检测食管癌及癌旁正常食管粘膜组织中RIOK3的表达情况,并分析RIOK3蛋白的表达与临床病理参数的关系。3.通过qRT-PCR和Western blot技术检测RIOK3 mRNA和蛋白在不同食管癌细胞株(NEC、KYSE-150、Eca109和EC9706细胞)和食管正常上皮细胞(HEEC)中的表达情况。4.利用瞬时质粒转染方法构建过表达和干扰RIOK3的食管癌细胞株模型,并通过qRT-PCR和Western blot验证。5.利用CCK-8、平板克隆实验检测过表达和干扰RIOK3后食管癌细胞的增殖能力,Transwell实验检测其迁移能力。6.利用Western blot技术检测过表达和干扰RIOK3后,食管癌细胞中EMT相关蛋白的表达情况。结果1.Oncomine和GEO数据库分析结果显示:相对于正常食管粘膜组织,食管癌组织的RIOK3 mRNA表达降低。2.IHC分析结果显示:食管癌组织石蜡样本中65.1%(31/48例)的癌组织中RIOK3蛋白表达水平明显低于其相配对的癌旁组织;RIOK3的表达与性别、年龄、肿瘤位置及淋巴结转移无显著相关性(P>0.05);在不同分化程度的食管癌组织中RIOK3表达差异显著,肿瘤分化程度越低,RIOK3的表达越低。3.检测RIOK3在食管癌细胞中的表达结果显示:RIOK3在Eca109、EC9706食管癌细胞中表达明显低于正常食管上皮细胞(P<0.05),而NEC、KYSE-150细胞表达与正常食管上皮表达差异不明显。4.qRT-PCR和Western blot方法检测发现,过表达RIOK3的EC9706细胞(EC9706.R)和ECa109细胞(ECa109.R)与转染空载质粒的EC9706(EC9706.vec)和ECa109(ECa109.vec)相比,RIOK3在mRNA和蛋白水平明显增高(P<0.05);干扰RIOK3的NEC细胞(NEC.shR2)和转染空载质粒的NEC(NEC.scr)相比,RIOK3在mRNA和蛋白水平明显降低(P<0.05)。5.CCK-8实验显示过表达RIOK3的食管癌细胞生长速度明显慢于对照组(P<0.05);而干扰RIOK3后,食管癌细胞生长速度明显快于对照组(P<0.05)。6.平板克隆实验显示:过表达RIOK3的食管癌细胞形成的克隆数明显少于对照组(P<0.05),而干扰RIOK3的细胞明显多于对照组(P<0.05)。7.Transwell实验结果显示:过表达RIOK3的食管癌细胞迁移数量较对照组明显减少(P<0.05);而干扰RIOK3的细胞明显多于对照组(P<0.05)。8.Western blot方法检测EMT相关蛋白的表达,结果表明:过表达RIOK3组E-cadherin表达上调,N-cadherin、Vimentin表达下调;干扰RIOK3组E-cadherin表达下调,N-cadherin、Vimentin表达上调。结论1.食管癌组织中RIOK3表达水平显著下调,RIOK3的表达与食管癌的分化程度呈正相关。2.过表达RIOK3可抑制进食管癌细胞的增殖、迁移,而干扰RIOK3则促进其增殖和迁移能力。3.RIOK3参与上皮间质转化调节,其表达与E-cadherin正相关,与N-cadherin、Vimentin负相关。