严重烧伤后患者往往出现显著的高代谢和高蛋白分解代谢, 如果合并全身性感染,这种代谢反应将更为剧烈,使机体陷入严 重的低蛋白血症和负氮平衡。骨骼肌作为人体最大的氮库,其大 量消耗将严重影响患者的预后,并对机体的整体代谢产生重要的 影响。但目前关于烧伤、脓毒症骨骼肌蛋白消耗的分子机制尚不 清楚。 研究目的：通过观察烧伤、脓毒症和烧伤合并脓毒症状态 下不同类型骨骼肌组织蛋白降解率的变化以及在蛋白代谢中发挥 重要作用的 ubiquitin-proteasome（泛素－蛋白酶体）蛋白降解途 径中部分主要组成成分转录和翻译水平的变化规律,初步探讨骨 骼肌蛋白降解增强的分子机理及其可能的调控机制,为临床控制 骨骼肌蛋白的高消耗提供理论依据。 材料和方法：雄性Wistar大鼠288只,体重50-60克,随机 分成三组：（1）单纯烧伤组（B组,n=96）,在大鼠背部 100℃沸水 持续12s造成30％Ⅲ°烫伤,伤后立即给予腹腔注射5％糖盐水4 0ml/kg复苏;（2） 单纯内毒素攻击组（L组,n＝96）,非麻醉状态 下给予腹腔注射大肠杆菌内毒素（O₅5B₅）10mg/kg;（3）烧伤合并 内毒素攻击组（B＋L组,n=96）,烧伤后给予腹腔注射内毒素10m g/kg。分别于烧伤和/或内毒素注射后2h、6h、12h、24h四个时 间点（每个时间点实验动物12只,正常对照12只）活杀后,腹 主动脉采血,测定血浆游离氨基酸、皮质醇、TNF-α、IL-6、内 毒素水平。无菌留取大鼠伸趾长肌和比目鱼肌标本,应用骨骼肌 充氧离体孵育系统测定骨骼肌蛋白降解率的变化,采用northern b1ot方法测定骨骼肌组织中泛素、E₂-14K、20s蛋白酶体亚基RC₂ 3转录表达的变化;western blot方法测定骨骼肌组织中泛素及泛素化蛋白的翻译水平变化;免疫组织化学方法分析骨骼肌组织中泛素及泛素化蛋白的含量及分布变化。 结果： 1 烧伤合并内毒素攻击组24h时间点血浆总氨基酸含量显著降低,单纯烧伤、内毒素攻击变化不明显;三组苯丙氨酸、3．MH水平显著上升,精氨酸、谷氨酚胺含量显著降低。其中血浆3-MH在烧伤合并内毒素攻击组增幅最大。 2 三组大鼠各时间点血浆皮质醇、内毒素和TNF－α、IL－6水平均升高,但增幅以烧伤合并内毒素攻击组最为明显,不仅显著高于正常对照,还显著高于其它两组。 3 三组大鼠伸趾长肌离体孵育液中 Tyr和 3－MH的释放量均显著增加,其中 3－MH的释放增加量明显高于 Tyf,比目鱼肌离体孵育液中TyF和3JAil释放量在烧伤合并脓毒症组显著增加,其它两组无明显改变,结果提示伸趾长肌总蛋白降解率和肌纤维蛋白降解率均出现增强,但以肌纤维蛋白降解率增强为主,Tyt和 3AlH释放量的上升以烧伤合并内毒素攻击组最显著,比目鱼肌蛋白降解率仅在烧伤合并脓毒症组显著增强。 4 三组大鼠伸趾长肌组织中泛素．蛋白酶体途径的主要组分泛素、EZd、205蛋白酶体亚基RCZ转录表达显著增强。烧伤合并内毒素攻击后6h时间点比目鱼肌组织中上述指标转录表达显著增强,但其它两组变化无统计学意义。 5 三组大鼠伸趾长肌组织中泛素类蛋白表达明显增强。单纯烧伤和内毒素攻击组大鼠比目鱼肌组织中泛素类蛋白表达变化不显著,烧伤合并内毒素攻击后6h 时间点比目鱼肌组织中泛素类蛋白表达显著增加。 6 相关性分析结果显示,三种不同病理状态下,反映骨骼肌蛋白降解的3－MH释放量、泛素．mRNA表达、泛素类蛋白水平与分解激素皮质醇和炎性介质内毒素、几6水平的变化之间呈显著正相关,而与TNF－a之间相关性不明显。 4 硕士论文 中文摘要 结 论： l 在烧伤、脓毒症、烧伤合并脓毒症条件下机体发生骨骼 肌蛋白的大量降解,快白肌（伸趾长肌）较慢红肌（比目鱼肌） 反应敏感,肌纤维蛋白较非肌纤维蛋白变化显著。 二 骨骼肌组织蛋白降解率的增强以及肌组织中泛素、EZ．14K d和RCZ亚基转录和翻译水平的显著升高,表明烧伤、脓毒症、 烧伤合并脓毒症病理状态下骨骼肌蛋白的降解增强主要与泛素． 蛋白酶体蛋白降解途径激活有关。 3 相关分析提示,烧伤、脓毒症、烧伤合并脓毒症病理状 态下皮质醇、TNF－a、IL巧和内毒素可能具有调控泛素．蛋白酶 体蛋白降解途径活性的作用。 4 比较发现,烧伤、脓毒症、烧伤合并脓毒症三种状态下 骨骼肌蛋白降解率的变化与伤情有一定的关系,其中单纯烧伤组