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目的： 预测RhD蛋白抗原活性表位，探讨随机噬菌体十二肽库筛选血型D抗原模拟多肽的影响因素，建立最佳筛选方案，得到RhD血型抗原的模拟表位。 方法： ⑴利用生物信息技术预测RhD蛋白抗原活性表位。⑵对比洗脱时间分别为4、8、12、16和30分钟的洗脱液滴度。⑶对比3轮清洗缓冲液中Tween20浓度分别为0.1％、0.2%、0.5%和分别为0.1%、0.5%、0.5%时每轮淘洗的投入/产出比和P/N值。⑷对比3轮封闭缓冲液均为0.5% BSA和分别为0.5%BSA、1%明胶、5%脱脂奶时每轮淘洗的投入/产出比和P/N值。⑸分析筛选效果，得出最佳筛选方案。ELISA法检测每轮淘洗后洗脱噬菌体的扩增液与IgG型单克隆抗-D的结合力。⑹测定采用最佳筛选方案筛选所得阳性克隆 DNA序列和做抗体竞争抑制试验、噬菌体凝集抑制试验，检测D抗原模拟表位。 结果： ①预测RhD蛋白的N端36-41、100-104、353-356区段为RhD蛋白抗原活性表位区域。②洗脱8分钟时洗脱液滴度为（2.31±0.25）×106 pfu/mL，洗脱4、12、16和30分钟时的洗脱液滴度与之相比明显下降（P＜0.01）。③当洗脱时间为8分钟且3轮封闭缓冲液均为0.5%BSA时，3轮淘洗清洗缓冲液Tween20浓度分别为0.1%、0.5%、0.5%时投入/产出比分别为1.69×107、4.95×105、9.58×102，P/N值分别为1.39±0.04、2.54±0.13、3.02±0.04；与清洗缓冲液Tween20浓度分别为0.1%、0.2%、0.5%时投入/产出比分别为2.70×107、4.57×105、1.14×103，P/N值分别为1.45±0.11、1.88±0.12、2.96±0.03相比，筛选效果影响不大。④当洗脱时间为8分钟且3轮淘洗清洗缓冲液Tween20浓度分别为0.1%、0.5%、0.5%时，3轮封闭缓冲液分别为0.5% BSA、1%明胶、5%脱脂奶时投入/产出比分别为1.93×107、6.44×103、6.23×101，P/N值分别为1.34±0.22、5.71±0.53、6.88±0.79，明显优于3轮淘洗封闭缓冲液均为0.5%BSA时的投入/产出比（分别为1.94×107、1.66×105、8.23×102）和P/N值（分别为1.32±0.11、2.64±0.34、3.40±0.66）。⑤随着淘洗轮次增加，优化的筛选方案（洗脱时间为8分钟，3轮淘洗的清洗缓冲液Tween20浓度分别为0.1%、0.5%、0.5%和3轮淘洗的封闭缓冲液分别为0.5% BSA、1%明胶、5%脱脂奶）每轮淘洗后洗脱噬菌体的扩增液与 IgG型单克隆抗-D结合力逐渐增强。⑥筛选得到的噬菌体十二肽序列“VHWDFRQWWQPS”与 IgG型单克隆抗-D竞争抑制率约为50%；对IgG型单克隆抗-D与O型RhD阳性红细胞的凝集具有明显的抑制作用，并呈现浓度依赖性。 结论： ⑴利用生物信息技术预测的3个RhD蛋白抗原活性表位可作为RhD蛋白潜在优势表位的参考。⑵洗脱时间、清洗缓冲液成分以及封闭缓冲液类型对筛选效率有一定影响。⑶洗脱时间为8分钟，3轮淘洗的清洗缓冲液Tween20浓度分别为0.1%、0.5%、0.5%和3轮淘洗的封闭缓冲液分别为0.5%BSA、1%明胶、5%脱脂奶时，筛选效果较优，可获得较理想的血型D抗原模拟多肽。⑷筛选得到的十二肽序列“VHWDFRQWWQPS”能有效抑制RhD血型抗原与此IgG型单克隆抗-D的结合。