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研究目的:利用经过基因编辑的溶瘤腺病毒1421、1423、1416促进宫颈癌组织中TIL细胞的增殖,使溶瘤腺病毒替代了细胞因子IL-2、IL-7等作用,降低培养费用、用简单的方法扩增出大量的TIL细胞。扩增达到一定的数量之后,把TIL细胞回输人体内,达到抗肿瘤的作用。材料与方法:用加入抗生素的PBS仔细冲洗肿瘤组织表面的血迹,用手术刀将肿瘤组织切割成直径大小约1-2mm,放入24孔板中再加入溶瘤腺病毒1421、1423、1416和完全培养基进行培养,培养过程中每间隔一天在倒置显微镜下观察孔中淋巴细胞的密度及状态,然后给每个孔拍照;再选取加入病毒的孔中的细胞进行HE染色,分辨有无淋巴细胞的存在;取培养的24h和120h的上清液进行ELISA实验检测其中的IL-2和IL-7细胞因子表达量;在培养到第10天时候取孔中细胞进行细胞流式检测,检测CD3+、CD3+/CD4+、CD3+/CD8+、CD45+、CD56+细胞的增值情况。结果:1.经ELISA检测可以得到溶瘤病毒1421在120h时表达的IL-2的量达到近700pg/ml,而在24h时几乎没有表达;而IL-7在1421组、1423组、1421+1423组、1421+CTX+MI、1423+CTX+MI组、1421+1423+CTX+MI组中,在120h的表达量分别为1700pg/ml、2200pg/ml、1750pg/ml、3000pg/ml、2000pg/ml、1500pg/ml,IL-7在1421+CTX+MI组中的表达量达到了最高,改进组合对于IL-7的表达有一定的影响。2.在显微镜下观察和HE染色都能够看到淋巴细胞的存在,对比第5天和第1天的细胞的密度,可以明显的观察到细胞有增殖。尤其在1421、1421+1423的组合中细胞有明显的增殖,但在所有的孔中培养的细胞在第14天后开始死亡,尤其是在加入CTX+MI组合中的细胞细胞死亡率较高;3.通过流式细胞术检测,1421、1416病毒都可以促进宫颈癌组织块中CD3+、CD8+TIL细胞的增殖,而且CD3+细胞增殖的比例比CD3+/CD8+增殖的比例高,CD3+细胞增殖的比例大约是CD3+/CD8+细胞增殖的一倍。在1416的孔中的CD3+和CD3+/CD8+细胞占有比例略比1421孔中的多,但是差别不明显;1416腺病毒能促进CC组织块中CD3+、CD3+/CD4+细胞的增殖,CD3+增殖的比例几乎是CD3+/CD4+增殖的比例的3倍;1421和1416两种病毒比较而言,CD45+细胞没有明显的区别,都在40%左右,说明这两种病毒都促进了初始T细胞的增殖;而CD56+和CD279几乎没有增殖。在改进病毒组合的24孔板中,可以到CD3+细胞在Blank组、1421组、1423组、1421+1423组合中可以看到,CD3+细胞的占比呈上升趋势,在1421+1423组合中CD3+的占有比例最高,约是BLank组的6倍。结论:1.因宫颈组织处于有菌环境,培养其原代细胞容易污染,相对较困难;2.宫颈组织块培养到第14天左右时TIL细胞容易死亡,可能是由于溶瘤腺病毒引起的耗竭作用;3.经过内照射放疗的宫颈癌组织块,在培养过程中TIL细胞更容易死亡,放射治疗可能损伤了宫颈肿瘤的免疫环境。4.相对于传统的扩增TIL的方法,溶瘤腺病毒1421、1423和1416能促进细胞分泌IL-2、IL-7,此方法简单易行,费用低。5.溶瘤腺病毒的改进组合促进CD3+细胞的增殖。