目的采用基因工程技术,将转化生长因子β(Transfer Growth Factorβ,TGF-β)前体相关蛋白(latency-associated protein,LAP)通过基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)水解部位与可溶性TNFⅠ型受体(soluble tumor necrosis factor receptorⅠ,sTNFRⅠ)相连,获得LAP-MMP-sTNFRⅠ融合蛋白。研究该蛋白的潜伏生物学活性和特异性激活方式,为局部特异性的sTNFRⅠ靶向给药治疗子宫内膜异位症(endometriosis,EMs)开拓新的思路。方法1.将编码MMP水解部位氨基酸的正反义DNA序列退火形成互补双链后定向克隆插入真核表达载体pcDNA3.1(+),得到pcDNA3.1/MMP重组体;将TGF-β1的LAP段和sTNFRⅠ与MMP水解部位连接,获得pcDNA3.1/LAP-MMP-sTNFRⅠ真核表达载体。2.采用脂质体转染技术介导重组质粒转染COS-7细胞,通过RT-PCR和免疫印记技术检测融合基因的表达。3.通过观察能否封闭TNF-α对L929细胞的胞毒效应,检测融合蛋白LAP-MMP-sTNFRⅠ经MMP及EMs患者腹腔液孵育前后的sTNFRⅠ生物学活性。结果1.酶切及测序结果证实,融合蛋白真核表达载体pcDNA3.1/LAP-MMP-sTNFRⅠ构建成功;转染后RT-PCR和免疫印记结果表明融合基因在COS-7细胞中得到有效表达。2. sTNFRⅠ生物学活性检测结果显示,在不同的TNF-α浓度下,pcDNA3.1/LAP- MMP-sTNFRⅠ转染上清组与空质粒转染上清组的细胞死亡率无显著性差异(P>0.05),且随着TNF-α浓度的降低细胞死亡率随之下降,具有剂量效应关系。将重组质粒转染上清液经MMP-2或EMs患者腹腔液孵育后,能明显降低L929的细胞死亡率(P<0.05)。结论成功构建融合蛋白真核表达载体pcDNA3.1/LAP-MMP-sTNFRⅠ,并获得可溶性肿瘤坏死因子受体I融合蛋白的表达。该融合蛋白以潜伏sTNFRⅠ的活性形式分泌,经MMP或EMs患者腹腔液孵育后sTNFRⅠ生物学活性能得以有效发挥,为EMs局部特异性的靶向给药治疗奠定基础。