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干扰素是由干扰素诱生剂诱导生物细胞后所产生的一类高活性多功能的糖蛋白.干扰素分为Ⅰ型和Ⅱ型,γ扰素属于Ⅱ型干扰素.猪γ扰素(porcine interferon-γ,plFN-γ)是由T细胞和NK细胞产生的,具有广谱抗病毒作用,也具有上调MHCⅡ(majo histocompatibility complexⅡ)类抗原分子的表达等作用,是影响机体细胞和体液免疫反应的一类具有多种调节效应的细胞因子.该实验从健康仔猪前腔静脉无菌采血,分离外周血单个核细胞(PBMC),用刀豆素A(Concanavalin A,ConA)诱导培养24h后,提取细胞总RNA,用猪γ干扰素(IFN-γ)基因特异性引物通过RT-PCR扩增了猪IFN-γ的全长cDNA序列,将其克隆到pMD18-T载体中,经序列分析表明,pIFN-γ cDNA共有501bp,其序列与GenBank上报道的pIFN-γ核苷酸序列同源性高达99.6﹪,与人、牛、羊、鹿、鼠、猴、狗、鸡等IFN-γ核苷酸序列同源性分别为68.6﹪、83﹪、83﹪、84.4﹪、50.1﹪、31.5﹪、41.9﹪、41﹪.将pIFN-γ基因再亚克隆到表达载体pET-30a中,构建重组表达质粒pET-30a-IFN-γ.重组质粒pET-30a-IFN-γ转化大肠杆菌(E.coli)BL21,于37℃经IPTG诱导表达4小时,SDS-PAGE分析表明该基因在大肠杆菌中获得了高水平表达,表达的融合蛋白以包涵体形式存在,分子量约为25ku,且表达产物占菌体总蛋白的39﹪.利用商品化IFN-γ多克隆抗体经Western blotting鉴定,确定该融合蛋白具有特异的反应活性.将包涵体用8mol/L脲变性,用ProBond Purification Systerm纯化,经透析复性,得到纯化的目的蛋白,蛋白浓度为0.3mg/ml.将复性蛋白免疫新西兰白兔,制备了猪IFN-γ多克隆抗血清,经ELISA检测证明所得到的多克隆抗血清与表达的融合蛋白具有良好的免疫反应性.该试验成功地克隆、表达、纯化了猪IFN-γ,并制备了兔抗猪IFN-γ的多克隆抗血清,为下一阶段猪γ干扰素重组蛋白生物学特性及其应用的研究奠定了基础.