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目的:卵巢癌的发病率居妇科恶性肿瘤第3位,病死率居首位。卵巢癌起病隐匿,缺乏早期的典型症状和成熟的早期诊断方法,且易于盆腹腔广泛种植播散,往往一确诊就是晚期,难以治愈。其5年生存率仅为35%～38%。虽然卵巢癌通常对以铂类化合物和紫杉烷为基础的一线化疗反应良好,但大多数患者会出现复发和化疗耐药。卵巢癌是一种高度异质性的肿瘤,其发病机制、复发机制和耐药机制尚不清楚。尽管多年以来人们对卵巢癌的认识有所提高,但仍然缺乏可靠的诊断标志物以及其他能够早期发现和适合筛查的诊断方法。因此,目前的研究旨在寻找新的具有诊断、预后和预测潜力的生物标志物以及寻找新的治疗靶点。再生基因家族（Regenerating islet-derived gene family,REG family）属于钙依赖性凝集素超家族,这些蛋白在功能上类似于凝集素,具有抗凋亡因子作用。REG基因编码分泌蛋白,在糖尿病、炎症损伤、自身免疫和癌瘤发生中起重要作用。随着对癌症发生发展及其机制研究的不断深入,已有文献报道REG4在多种肿瘤中高表达,对肿瘤的发展、治疗和预后产生重要影响,但关于REG4在卵巢癌中的预后及耐药机制少见报道。本课题旨在评估REG4表达在卵巢癌中及DDP和紫杉醇化疗的卵巢癌中的临床病理意义,探索REG4在卵巢癌中对于化疗药物DDP和紫杉醇的耐药机制,从而为卵巢癌的诊断、筛查、治疗和预防提供科学的实验基础。研究方法:1、利用Oncomine数据库、UCSC Xena数据库分析REG4在卵巢癌和正常组织中的表达情况,利用c Bio Portal数据库分析卵巢癌中REG4相关基因的表达情况;采用Kaplan-Meier Plotter分析卵巢癌中REG4表达与卵巢癌患者预后的关系;从TCGA数据库下载卵巢癌数据,通过GSEA方法进行REG4相关通路富集分析;2、稳定转染pc DNA3.1-REG4真核表达质粒和pc DNA3.1空载体至CAOV3卵巢癌细胞,采用实时RT-PCR和Western blot筛选REG4过表达细胞株;通过MTT法、流式细胞术、Transwell法分别检测REG4过表达对卵巢癌细胞CAOV3和顺铂/紫杉醇处理后的卵巢癌细胞CAOV3的增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响;3、Western blot检测REG4过表达对卵巢癌细胞CAOV3和顺铂/紫杉醇处理后的某些蛋白表达变化。结果:第一部分:卵巢癌中REG4表达的预后意义及其作用机制。1、Oncomine数据库显示,REG4在多种癌症中高表达,显然,在卵巢癌中也呈高表达（P<0.05）。UCSC Xena数据库分析表明,REG4在卵巢癌中的表达水平显著高于正常卵巢组织,且复发卵巢癌中REG4的表达水平明显高于原发卵巢癌（P<0.05）;c Bio Portal数据库显示REG4的表达与Bid、Fas、AIF1等促凋亡因子的表达呈明显负相关,而与细胞周期蛋白依赖激酶CDK4、抗凋亡因子Bcl-2、促增殖因子Raf和药物代谢相关酶ALDH1A1、GSTA1、GSTA2、UGT2A3的表达呈正相关（P<0.05）。2、REG4高表达与所有卵巢癌患者的总体生存率（Overall survival,OS）、无进展生存率（Progression-free survival,PFS）和进展后生存率（Post-Progression survival,PPS）降低相关（P<0.05）。REG4高表达的浆液性、临床分期Ⅰ～Ⅳ期和病理分级Ⅱ～Ⅲ级的卵巢癌患者具有较低的总体生存率;REG4低表达的浆液性、临床分期Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ期和病理分级Ⅲ级的卵巢癌患者具有较好的无进展生存率;临床分期Ⅲ期、病理分级Ⅱ级的卵巢癌患者的进展后生存率与REG4的表达呈负相关（P<0.05）。3、卵巢癌细胞CAOV3稳定转染pc DNA3.1-REG4后,通过实时RT-PCR、Western blot检测REG4 mRNA和蛋白表达均升高（P<0.05）;4、REG4高表达,促进卵巢癌细胞CAOV3细胞增殖,抑制细胞凋亡,增强细胞迁移和侵袭能力（P<0.05）。5、上调REG4蛋白表达促进Ki67、Bcl2、MMP9和GST-π蛋白表达;抑制AIF蛋白表达。REG4与凋亡通路相关基因呈负相关富集,与药物代谢细胞色素P450相关基因呈正相关富集（P<0.05）。第二部分:铂/紫杉醇化疗的卵巢癌中REG4表达的预后意义及其作用机制。1、REG4高表达与铂化疗的卵巢癌患者较低的总体生存率、无进展生存率和进展后生存率相关（P<0.05）,紫杉醇化疗的卵巢癌患者中REG4的高表达者具有较低的总体生存率和无进展生存率（P<0.05）。在铂化疗的浆液性、Ⅲ-Ⅳ临床分期以及所有病理组织学分级的卵巢癌患者中,REG4高表达与较低的总体生存率相关;REG4高表达的铂化疗的浆液性、所有临床分期、病理组织学Ⅲ级及TP53突变的卵巢癌患者具有较低的无进展生存率,且经过铂化疗的Ⅲ-Ⅳ临床分期、所有病理组织学分级的卵巢癌患者的REG4高表达与其不良进展后生存率相关。而在紫杉醇化疗的浆液性、Ⅲ-Ⅳ临床分期以及病理组织学Ⅲ级卵巢癌患者中,REG4高表达与较低的总体生存率相关;经过紫杉醇化疗的浆液性、所有临床分期以及病理组织学Ⅲ级的卵巢癌患者,其REG4高表达者具有较低的无进展生存率;另外,REG4 mRNA高表达与紫杉醇化疗的病理组织学Ⅲ级的卵巢癌患者的不良进展后生存有关。2、过表达REG4促进顺铂和紫杉醇处理的卵巢癌细胞CAOV3的增殖、迁移和侵袭能力;抑制顺铂和紫杉醇处理的卵巢癌细胞CAOV3的凋亡。3、过表达REG4促进顺铂和紫杉醇处理的卵巢癌细胞CAOV3 P-Pi3K、P-AKT、P-m TOR、Survivin、Bcl2、GST-π的表达。结论:卵巢癌中REG4表达上调,与卵巢癌患者的不良生存及化疗耐药相关。REG4通过调节细胞的增殖、凋亡、迁移、侵袭和Pi3K/AKT/m-TOR信号通路来促进卵巢癌的发生发展和化疗耐药,可作为卵巢癌预后评估和基因治疗的分子靶标。