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研究目的通过慢病毒建立miR-206高表达和低表达的MCF-7细胞株,研究三组细胞生物学特征,探索miR-206在MCF-7细胞增殖和转移中的作用;探讨4-OH TAM对三组细胞的生物学变化及内分泌治疗敏感性的改变。研究方法1.分别构建miR-206的慢病毒表达质粒及抑制质粒,包装慢病毒,感染乳腺癌MCF-7细胞使其稳定过表达及低表达miR-206。2.实时定量PCR检测MCF-7细胞、miR-206过表达MCF-7和miR-206低表达MCF-7中miR-206的表达情况。3.通过CCK8法、细胞计数法检测三组细胞的增殖能力变化,并绘制生长曲线;划痕愈合实验比较三者的细胞迁移能力;流式细胞仪分析细胞凋亡情况。4.以5μM 4-OH TAM处理三组细胞48小时后,检测三组细胞的增殖情况并绘制生长曲线:western blot法测相关蛋白变化;流式细胞仪分析细胞凋亡情况。研究结果我们通过慢病毒转染建立miR-206高表达MCF-7和miR-206低表达MCF-7,real-time PCR检测到miR-206高表达MCF-7的miR-206表达水平较其他两组高,具有统计学意义(P<0.05)。随着时间的推移,miR-206高表达MCF-7细胞的增殖速度较其他两组细胞有减慢的趋势。经过5μM 4-OH TAM处理48小时或72小时后,对照组和加药组中三组细胞的迁移能力均未见明显差别。流式细胞仪检测到,药物处理48小时后,MCF-7和miR-206高表达MCF-7的凋亡程度比miR-206低表达MCF-7的凋亡程度高,提示miR-206低表达MCF-7对TAM较其他两组更不敏感。经过药物处理的MCF-7、miR-206高表达MCF-7细胞,p21表达水平较用药前明显升高,在miR-206低表达MCF-7细胞用药前后p21表达水平无明显差别:经过药物处理的miR-206高表达MCF-7和miR-206低表达MCF-7细胞,bcl-2表达水平较川药前明显降低,在 MCF-7细胞中其表达水平用药前后无明显差别:miR-206高表达MCF-7的ERα、NRP1、PKCε的表达水平均比其他两组细胞低。结论MiR-206可能参与ERa的调控以及ER阳性乳腺癌细胞的凋亡。MiR-206可能与内分泌治疗的敏感性有关;与MCF-7和miR-206高表达MCF-7相比,miR-206低表达MCF-7对三苯氧胺的敏感性较差。NRP1、PKCs可能是miR-206的下游调控基因,这些基因对乳腺癌细胞生物学的影响,值得进一步研究。研究背景围手术期的人体微环境可能影响微转移灶的生物学特征,甚至促进肿瘤复发转移。人体微环境随着月经周期变化而变化。目前,对于在月经周期的不同阶段进行手术治疗是否会影响绝经前乳腺癌患者的预后,仍存有不同意见。研究方法将2000-2002年在复旦大学附属肿瘤医院手术的554例绝经前乳腺癌患者,按手术时间及月经状态分为卵泡期手术组(患者在月经周期第1-14天接受手术)和黄体期手术组(患者在月经周期第15-31天接受手术)两组,回顾性分析影响绝经前乳腺癌病人术后复发转移的因素。单因素生存分析用Kaplan-Meier法估计,并用时序检验(Log-rank test)进行组间比较;多因素生存分析采用Cox风险比例模型法。P<0.05为差异有显著意义。所有统计处理采用Stata 10.0软件进行运算。由于不同个体月经周期长短不同,卵泡期和黄体期的分界值也不同,我们将分别将月经周期第10-22天分别作为分界值以排除个体差异对临床结果的影响。研究结果Cox风险比例模型结果显示,卵泡期手术组的无病生存率(HR=0.318,95%CI:0.10-0.99,P=0.049)和总生存率(HR=0.260,95% CI:0.07-0.92,P=0.036)均高于黄体期手术组。当卵泡期和黄体期的分界值设置在月经第14、18、19天时,卵泡期手术组DFS较黄体期手术组有明显改善;当分界值设置在月经第11、13、14天时,卵泡期手术组OS也有明显延长。分界值设置在月经第10-22天时可见风险比有低幅度波动,无论是DFS还是OS,在月经周期第22天以后风险比值上升。结论与黄体期手术组的绝经前乳腺癌患者相比,卵泡期手术组的预后更好。针对不同患者不同月经状态的手术时机可能提高治疗效果,可能成为乳腺癌个体化治疗的一个方面。