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[目的]用氧化硫酸软骨素（OCS）、氧化透明质酸（OHA）复合Ⅱ型胶原（COLⅡ）构建仿生软骨凝胶（BCG）;将人脐带间充质干细胞（hUCMSCs）与BCG混合后构建细胞—凝胶,为体内软骨修复奠定组织工程方面基础。[方法]第一部分 COLⅡ提取、OCS及OHA制备通过去除蛋白多糖、酶解、盐析、离心、透析等一系列步骤从贵州小香猪离体膝关节软骨中提取COL Ⅱ,并用盐酸溶液进行保存。用高碘酸钠（NaI04）分别对硫酸软骨素（CS）及透明质酸（HA）进行氧化;用傅里叶变换红外光谱（FTIR）分析对OCS及OHA中醛基进行表征,用碱消耗法测定OCS及OHA氧化度。第二部分制备凝胶将COLⅡ调节pH值至7.5,分别加入CS-HA溶液、CS-OHA溶液、OCS-HA溶液及 OCS-OHA 溶液制备凝胶,比较 COLⅡ-CS-HA、COLⅡ-OCS-HA、COLⅡ-CS-OHA、COL Ⅱ-OCS-OHA抗压强度;对COL Ⅱ-OCS-OHA进行吸水溶胀率测定、FTIR分析、组织学评估（HE染色、Masson染色、阿尔新蓝染色）。第三部分COLⅡ-OCS-OHA与人脐带间充质干细胞（hUCMSCs）复合培养培养hUCMSCs,将第五代细胞与COL Ⅱ-OCS-OHA进行复合培养28天。对刚制作的细胞-凝胶固定脱水后进行石蜡切片,并进行HE染色、Masson染色及阿尔新蓝染色;对培养第1天、第3天、第5天及第7天细胞-凝胶固定脱水后进行石蜡切片,进行HE染色;对培养第14天、21天及第28天细胞-凝胶固定脱水后进行石蜡切片,进行HE染色、Masson染色及阿尔新蓝染色。[结果]第一部分 COLⅡ提取、OCS及OHA制备从贵州小香猪猪离体膝关节软骨片中提取的COLⅡ溶于0.15mol/l盐酸中,最终质量分数为10%;OCS及OHA氧化后分子中含醛基,且氧化度分别为51.62±0.49%、61.63±1.56%。第二部分 制备凝胶COL Ⅱ与OCS/CS-OHA/HA在混合后可以形成凝胶（COL Ⅱ-CS-HA除外）,凝胶呈乳白色,圆饼状,抗压强度测试后所有凝胶均未产生裂缝。COLⅡ-CS-HA无法成胶。COL Ⅱ-OCS-OHA抗压强度明显大于COL Ⅱ-CS-HA、COLⅡ-OCS-HA及 COL Ⅱ-CS-OHA。COL Ⅱ-OCS-OHA 吸水溶胀率为 91.75%±4.53%;FTIR 提示COL Ⅱ-OCS-OHA中COLⅡ三螺旋结构仍存在,OCS与OHA中醛基消失,三种物质已发生反应。组织学切片提示COL Ⅱ-OCS-OHA中含COL Ⅱ与GAG,COL Ⅱ-OCS-OHA形成网状结构,各成分在其中分布均匀。第三部分 COL Ⅱ-OCS-OHA与hUCMSCs复合培养细胞在接种过夜后完成贴壁,细胞呈多边形、短梭形不规则形等,排列紊乱;培养第3-4天时,细胞可排列呈环状;当培养到5-7天时,细胞多呈长梭形,呈簇状排列,细胞融合度高;在模具中细胞-凝胶能成型,在进行固定及脱水后细胞-凝胶皱缩,HE染色可见细胞较为均匀分布于BCG中;Masson染色细胞外基质为蓝色,且整体颜色较为均一;阿尔新蓝染色提示细胞外基质中染色为浅蓝色,表明所含GAG分布均匀。当细胞-凝胶培养到14天、21天及28天时,细胞-凝胶边缘无规整,HE染色中可见细胞-凝胶中仍有细胞存在;Masson染色呈蓝色,阿尔新蓝染色可见较为均一浅蓝色,提示凝胶中含COLⅡ及GAG。[结论]第一部分 COLⅡ提取、OCS及OHA制备1贵州小香猪离体膝关节软骨经酶解可以提取COLⅡ。2 CS/HA经NaIO4氧化可生成含醛基的OCS/OHA。第二部分制备凝胶COL Ⅱ-OCS-OHA可形成具有一定抗压强度的凝胶,且抗压强度显著大于COL Ⅱ-CS-HA、COL Ⅱ-OCS-HA 及 COL Ⅱ-CS-OHA,COL Ⅱ-OCS-OHA 内形成网状结构,主要成分为COLⅡ及GAG类物质。第三部分COL Ⅱ-OCS-OHA与人脐带间充质干细胞复合培养可一步完成细胞-凝胶制作,BCG具有一定细胞相容性,为体内软骨修复奠定组织工程方面基础。