山羊激活素A型受体基因cDNA的克隆及定量表达研究

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激活素(activin, ACT)在体内发挥生物学功能时必需借助特异性的受体系统,ACT的信号传递是通过在靶细胞膜上结合的两种类型的受体即I型受体和II型受体的复合体而进行的,两种类型的受体均属于丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶受体家族成员。激活素和II型受体结合,使II型受体磷酸化进而激活I型受体激酶,接着I型受体的细胞质内的功能区与细胞内信号分子Smads等相互作用,进而将信号转导入细胞核调节靶基因的转录、表达。目前国内尚无山羊激活素A型受体基因(activin receptor A,ACTR A) cDNA序列的报道,为探讨ACTR A在不同组织中的表达,研究ACTR A对不同山羊繁殖力的影响,本实验以大足黑山羊、南江黄羊和萨能奶山羊为研究对象,参考GenBank发表的绵羊(Ovis aries)和奶牛(Bos Taurus) ACTR A mRNA序列设计特异性引物,通过RT-PCR方法克隆了山羊ACTR A基因,并对其核苷酸序列、氨基酸序列和蛋白质结构进行了分析。同时,采用实时荧光定量PCR技术检测了三个山羊品种(遗传资源)在卵泡期内心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、卵巢、垂体等7种组织中的ACTRⅠA和ACTRⅡA的表达水平。主要研究结果如下:1、从山羊卵巢组织中克隆获得山羊ACTR A基因编码区序列(GenBank登录号:HQ245710、HQ701674),ACTRⅡA基因编码区序列长为1120 bp,ORF 1088 bp,编码342个氨基酸;ACTRⅠA长为1311 bp,ORF为1256 bp,编码418个氨基酸。2、通过对不同山羊品种(遗传资源)ACTR A编码区核苷酸序列进行比对,发现,山羊ACTRⅡA基因碱基序列与人、牛、绵羊、小鼠的ACTRⅡA基因相同区段的同源性分别为95%、98%、99%、93%;ACTRⅠA基因碱基序列与绵羊、牛、野猪、犬、人、小鼠、大鼠的同源性分别为98%、98%、98%、93%、92%、88%、93%。这表明ACTR A在进化过程中保持高度的保守性。3、应用Real-time PCR技术检测ACTR A在不同组织中的表达,结果显示该基因在不同品种山羊的心脏、肝脏、脾脏、肺、肾脏、卵巢和垂体中都能检测到。ACTRⅠ和ACTRⅡ在肾脏中含量最高,心、肺中含量最低,各组织中ACTRⅠA与ACTRⅡA呈极显著正相关(P<0.01)。萨能奶山羊ACTRⅠA含量极显著高于南江黄羊及大足黑山羊(P<0.01),南江黄羊、大足黑山羊与萨能奶山羊各组织中ACTRⅡA含量差异不显著(P>O.05)。4、本实验中繁殖力较低的萨能奶山羊卵巢ACTRⅡA与ACTRⅠA比值显著低于高繁殖力山羊,在卵泡期,ACTRⅡA与ACTRⅠA表达量的比值高低可影响山羊的排卵数,减少IA型受体含量,有可能通过控制下游信号的传导,提高山羊的排卵数量。
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