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第一部分巴多昔芬改善主动脉缩窄C57BL/6J小鼠的心肌重构目的:IL-6作为炎症因子参与心肌重构和心力衰竭的发生发展,但IL-6/gp130/STAT3信号通路在压力负荷性心肌重构中的具体作用目前仍有争议。课题组在之前的研究中发现巴多昔芬作为一种已被批准用于预防绝经后女性骨质疏松的选择性雌激素受体调节剂,能够在肿瘤细胞中抑制IL-6与gp130结合并阻断其下游信号通路转导,因此巴多昔芬亦可能影响心肌重构。本部分拟探究巴多昔芬对主动脉缩窄造模的C57BL/6J小鼠的心肌重构和心功能不良是否具有治疗作用。方法:采用H9c2心肌细胞检测IL-6及BAZ对细胞肥大的作用。8周龄约25 g体重的C57BL/6J野生型小鼠随机分为sham组、TAC组和TAC+BAZ（BAZ）组,BAZ组给予以环糊精为助溶剂含BAZ的混合液灌胃,sham及TAC组给予不含BAZ的单纯溶剂灌胃。分别在造模4周和8周时检测各组小鼠心脏功能、体重、胫骨长度,并取心脏标本,测量心脏重量后制作切片,通过心肌组织Masson、天狼星红染色及PCR检测判断各组小鼠心肌肥厚及纤维化程度。结果:IL-6能够促进H9c2心肌细胞肥大并增加ANP、BNP的转录水平,IL-6诱导的上述效应可被BAZ抑制。TAC造模小鼠的心脏增大,同时心脏重量、心脏重量/体重、心脏重量/胫骨长度比值均有增加,应用BAZ能够降低这些指标。心脏超声及组织切片结果显示造模术后4周时TAC组小鼠出现心肌重构但心脏功能无显著下降,此时BAZ的保护作用不明显,对心功能无显著影响。在造模8周时TAC组小鼠出现严重的心功能不良伴心肌重构,BAZ能够缓解造模导致的心肌重构,改善心脏功能,并降低心肌肥大及纤维化分子生物学指标的转录水平。结论:BAZ能够减轻IL-6诱导的H9c2心肌细胞肥大,同时在主动脉缩窄造模小鼠中,对压力负荷性心肌重构及心脏功能减低具有一定的治疗作用。第二部分巴多昔芬调控IL-6/gp130/STAT3信号通路和自噬及其在压力负荷性心肌重构中的作用目的:巴多昔芬在肿瘤细胞中能够抑制IL-6下游信号转导,且对TAC导致的小鼠心肌病变具有治疗作用,但对于其是否能够在H9c2心肌细胞及TAC小鼠心肌中抑制IL-6/gp130/STAT3信号通路,以及BAZ对细胞、动物自噬指标的影响目前仍不清楚。本部分拟进一步探索BAZ治疗压力负荷性心肌重构的具体机制,探究其在心肌细胞和小鼠心脏中对IL-6信号通路和自噬的作用。方法:利用第一部分研究中的实验动物组织进行免疫组织化学染色等分子生物学技术检测IL-6信号通路活性和自噬指标的改变。取8周龄25 g体重的C57BL/6J小鼠同前所述分组并予以灌胃处理,在造模后3小时收取小鼠心脏标本,采用western blot检测TAC造模急性期IL-6信号通路和自噬指标的改变。在H9c2细胞中采用western blot检测IL-6在AngⅡ诱导的STAT3磷酸化中的作用,以及IL-6、BAZ对下游信号通路和自噬指标的影响,并利用氯喹和RFP-GFP-LC3双荧光标记LC3,探究IL-6/gp130/STAT3信号通路改变自噬的可能环节。结果:在H9c2细胞中AngⅡ能够诱导STAT3磷酸化,并可被s IL-6R抑制,提示IL-6在AngⅡ/STAT3信号通路中的介导作用。在TAC造模后3小时和8周,心脏组织IL-6/gp130/STAT3信号通路均被激活;造模后3小时心脏LC3-Ⅱ表达下降,而造模8周时心脏LC3-Ⅱ表达上升。BAZ在两个时间点都能抑制STAT3磷酸化,并降低造模8周时小鼠心肌IL-6浸润,STAT3磷酸化和MMP2及IL-6的转录水平。然而,在造模后3小时BAZ能够翻转TAC导致的LC3-Ⅱ表达下降,而在造模8周的心肌中,BAZ抑制异常增加的LC3-Ⅱ表达。在H9c2细胞中短时间IL-6刺激（30分钟）降低LC3-Ⅱ表达,BAZ能够翻转这一改变,同样的IL-6刺激促进RFP-GFP-LC3双荧光标记中绿色荧光的淬灭,BAZ和STAT3抑制剂stattic能够增加绿光强度。此外,在H9c2细胞中,stattic在抑制IL-6诱导的STAT3磷酸化的同时,能够翻转IL-6刺激所降低的LC3-Ⅱ表达水平,而IL-6亦能够部分降低氯喹诱导升高的LC3-Ⅱ。结论:IL-6在AngⅡ/STAT3信号通路转导中发挥介导作用。TAC导致持续的IL-6下游信号通路激活,BAZ能够抑制这一改变。IL-6刺激能够促进自噬体溶酶体融合和酸化,抑制STAT3磷酸化能够阻碍这一过程。在TAC造模的急、慢性期出现截然不同的LC3-Ⅱ表达改变,可能与心肌炎症和自噬在疾病演变过程中的动态改变有关,BAZ能够通过抑制IL-6/gp130/STAT3信号通路发挥抗炎作用而调节LC3-Ⅱ的表达,从而在一定程度上减轻TAC导致的心肌重构。