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长期肠外营养支持的外科危重患者可出现肠黏膜屏障损伤及肠道微生物移位入血引起全身感染及发热,不恰当的抗生素应用不但无疗效且会进一步损伤肠粘膜屏障；因此有必要建立快速鉴别血中细菌及真菌等各类微生物的方法。本研究旨在建立实时定量PCR (RQ-PCR)以真菌通用引物和探针快速准确检测人全血标本中侵袭性真菌DNA载量的方法并与细菌相鉴别及进行初步临床应用。在论文中,选择临床常见基因组多拷贝基因5.8S rDNA作为靶基因设计特异性引物和TaqMan探针,采用QIAamp(?) DNA Blood Mini Kit提取多种致病真菌基因组DNA,建立20μl RQ-PCR反应体系,对含有不同载量致病真菌的模拟人全血标本和71份外科发热患者全血标本进行侵袭性真菌基因组的定量检测。结果显示本方法的特异性良好,检测限为1.0×101copies/μl上机待测的扩增反应液(即约1.0×105copies/ml全血)；检测灵敏度和特异度分别为95.5%和97.6%,阳性预告值和阴性预告值分别为98.7%和92.0%；标准曲线R2在0.9931-0.9977之间；批内及批间平均重复性变异系数(CV)分别为(10.4±4.0)%和(27.9±2.0)%；人血标本中真菌基因组DNA平均回收率为(91.0±7.6%),相对回收率平均变异系数为(14.9±4.0)%。71份外科发热患者血标本中未检测出侵袭性真菌基因组。RQ-PCR可以借通用真菌引物和TaqMan探针快速、特异、灵敏地定量检测人血标本中侵袭性真菌DNA的载量并可与细菌相鉴别,且有着较好的准确度与精密度。外科发热患者血中侵袭性真菌基因组的存在率可能很低。