MDA5信号通路与小鼠肝脏ALPPS术后肝脏再生的关系

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目的:建立小鼠ALPPS(associating liver partition and portal vein ligation for staged heptectomy,联合原位肝劈开和门静脉分支结扎)手术模型模型,研究黑色素瘤分化相关基因5(melanoma differentiation associated gene-5,MDA5)信号通路在ALPPS术式中对肝细胞再生的影响,为ALPPS术式的成熟的发展提供参考及指导。方法:取60只C57/BL6小鼠以随机数表法平均分为三组,分别为ALPPS(联合原位肝劈开门静脉结扎)手术组,PVL(门静脉结扎)手术组,SHAM(假手术)组,每组样本量为20只,并对其进行对应的分组处理。将小鼠麻醉后,自腹正中切口入腹,钝性分离肝镰状韧带以及肝胃韧带从而使小鼠肝脏得到充分显露,将小鼠肝脏的尾状叶、右叶、中叶各自对应的动脉分支、胆管分支以及门静脉分支的游离清晰。SHAM组直接在上述操作后缝合。PVL组结扎左外叶、右中叶和右叶的门静脉分支。ALPPS组则在PVL组的基础上,沿着门静脉结扎后产生的肝中叶缺血线,将中叶离断。Western Blot法检测TNF-α和MDA5于不同术式影响下的表达变化情况,测量不同分组下的肝脏再生指数,通过肝脏切片的HE染色观察肝内细胞肥大再生情况,并结合前两者评估肝脏再生情况;通过免疫组化法检测肝内Ki-67阳性蛋白表达来评估肝细胞增殖情况。结果:术后第4日和第7日的ALPPS组的肝脏再生指数(P<0.05)和HE染色平均每镜野下肝细胞总数高于PVL组(P<0.05)。术后第2日的TNF-α表达以及Ki67阳性细胞比例ALPPS组高于PVL组,且两者有统计学差异(P<0.05)。而ALPPS和PVL术后第4日、第7日的TNF-α趋同(P>0.05)。术后第2日、第4日、第7日的ALPPS组的MDA5表达高于SHAM组和PVL组(P<0.05)。结论:在小鼠模型下,ALPPS术式相较于PVL术式有更好的促肝再生能力,同时在ALPPS介导的肝再生过程中,MDA5的表达更为显著;在小鼠术后肝再生的进程中MDA5的表达可能起关键作用。
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